试验Ⅱ-细胞生物学教研室.PPTVIP

清点物品（4人组为单位） 手术器材一套（剪刀2、镊子2、止血钳1、解剖针1） 推片2片 蜡盘、小平皿、大头针、纱布等 载片若干（浸于酒精中） 每组取出约20片置于平铺的纱布上，晾干备用。 试剂： 染液：1％甲苯胺蓝、1％甲基兰 Ringer氏液（两栖类用） 实验五、动物细胞基本形态观察 实验目的： 1.熟悉捣髓法处死蟾蜍的方法； 2.观察不同细胞的基本形态； 3.掌握不同细胞临时制片的制作方法； 4.掌握生物绘图方法。 实验用品 材料和标本：蟾蜍一只 器材和仪器：光学显微镜、载片若干（浸于酒精中，用时取出晾干，用毕后洗净再浸到酒精中）、盖片若干、吸水纸、手术器材一套（6件）、蜡盘、小平皿、大头针、消毒牙签、推片、纱布。 试剂：1％甲苯胺蓝、1％甲基兰、Ringer氏液 （两栖类用） 本次实验制备、观察如下细胞： 生物绘图要求： 实验报告 按生物绘图要求分别绘制所观察的4种细胞,并注明基本结构。 实 验 内 容 1. 捣髓法处死蟾蜍 左手持蛙，将其腹面朝向手心，前肢夹在食指和中指之间，后肢夹在无名指和小指之间，并用拇指按压蟾蜍头部使之下俯； 将解剖针刺入枕骨大孔，先向前刺入颅腔，搅动捣毁脑，再向后捣毁脊髓，使蛙全身肌肉处于松弛瘫软状态。 2.用大头针将蟾蜍四肢钉于蜡盘上，剪开腹部的皮肤、腹腔和胸腔，暴露心脏，将动脉干或心室剪一小口。 晾干后镜检 （二）蟾蜍肝脏压片的制备与观察 1.剪开蟾蜍腹腔，取一小块肝（约2～3mm3）放 在小平皿内，滴Ringer氏液，用镊子轻压将肝 中的血挤出。 2.将肝组织放在载片（事先晾干）上，再取一张 载片错开放于肝组织上，用拇指垂直用力挤压。 3.掰开两张载片即可得到压片。在压片上滴一滴 甲基兰染液，染色5-10分钟。 4.盖上盖片，吸去多余染液，镜检。 结果：肝细胞紧密排列，挤成多角形；核染成兰色。 染色较深（深紫色）的小细胞是神经胶质细胞；染成蓝紫色、体积较大、有多个突起的细胞是脊髓前角运动神经细胞，胞体呈三角形或星形，中央有一个圆形细胞核，内有一个核仁。 （四）人口腔上皮粘膜细胞临时制片 取载玻片，滴一滴甲苯胺蓝 刮取口腔上皮细胞涂于甲苯胺蓝中 盖好盖玻片，将多余的染液吸干净。(盖片表面不能有染液) 4. 观察 口腔上皮细胞为扁平的不规则多边形细胞，内部可见染成蓝紫色的细胞核，细胞质淡染，可见大小不等的颗粒状物质. 注意事项 盖玻片与载玻片成45°缓慢下放，尽量避免产生气泡。 细胞折光性强，染色较浅，视野应适当调暗。 不用油镜观察。 实验结束后： 载玻片——洗净，擦干，浸到酒精中推片、平皿、大头针——洗净，擦干，放回原处；用过的盖玻片——丢弃动物尸体——丢弃到指定地点 清洗手术器械和蜡盘,手术器械清洗后务必擦干 清点手术器材（剪刀2、镊子2、止血钳1、解剖针1） 各种用品摆放整齐 正确放置显微镜，登记显微镜使用情况 值日生留下（13～18号） * * * * * * * 蟾蜍血细胞 蟾蜍肝细胞 蟾蜍脊髓前角运动神经细胞 人口腔上皮粘膜细胞 生物学临时制片的一般步骤： 1．取材 2．将材料放在载玻片上 3．固定 4．染色 因材料的来源、性质和制片目的不同，各种临时制片的方法、用料等不尽相同，有的制片可省略固定或染色的步骤。 细胞膜 细胞核 细胞质 寻找典型物像绘图 铅笔绘图、铅笔标注 布局合理，大小适当 实事求是，不模式化 用疏密小点表示明暗 标明各部位名称,引线尽量水平引出且彼此平行 注明标本名称、放大倍数、绘制时间及绘制人 标本名称： 放大倍数：物镜×目镜的放大倍数 绘制时间： 绘制人： （一）蟾蜍血涂片的制备与观察 方法： 注意： 抓取蟾蜍时，勿挤压两侧耳部突起之毒腺（耳后腺），以免毒液射进眼中。 枕骨大孔 枕骨大孔位于头部与身体交界处 手持解剖针沿蟾蜍头部的中线下划，可触及一凹陷处，即为枕骨大孔。 解剖针先垂直刺入枕骨大孔(只刺穿皮肤)，随即向前探入颅腔，左右搅动破坏脑组织；再将解剖针退回至进针处，但不拔出而是转向后方刺入椎管，破坏脊髓。 3. 取一张载玻片, 用左手拇指和食指夹持载玻片的两端，右手取一张推片, 用其一角蘸取一滴蟾蜍血液，点于载玻片的一侧。 点于载片上的血液不宜过多 4. 推片 5. 镜检，绘图 结果：可见蟾蜍红细胞为椭球形，有核。 白细胞数目少，为圆形。 在毒腺下方剪去头部 从躯干一侧的椎管中取少量脊髓放于小平皿内, 用Ringer氏液洗去血液后放在载片上。 剪碎脊髓，压片, 方法同肝脏压片。 在压片上滴一滴甲苯胺蓝染液，染色10分钟。 盖上盖片，吸去多余染液，镜检，绘图。 （三）蟾蜍脊髓压片的制备和脊髓前角运