重组灵芝免疫调节蛋白对环磷酰胺致小鼠白细胞减少症模型治疗及其机制研究.pdfVIP

  内容提要  本文探讨了重组灵芝免疫调节蛋白（Recombinant Ganoderma Lucidum Immunoregulatory Protein，rLZ-8 ）对环磷酰胺致小鼠白细胞减少症模型治疗及 其机制。通过给予不同剂量的环磷酰胺，分别建立单阶段和多阶段环磷酰胺致 小鼠白细胞减少症的模型。每日两次腹腔注射 rLZ-8 治疗白细胞减少症，动物 血液分析仪对中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞数量进行分析，发现 rLZ-8 可 以显著治疗由环磷酰胺引起的小鼠白细胞减少症，特别是可以增加体内中性粒 细胞、淋巴细胞、单核细胞数量。应用 WST-1 方法检测 rLZ-8 对小鼠脾脏细胞 的作用，结果显示 rLZ-8 能够增殖小鼠脾脏细胞的刺激，具有潜在的提高机体 免疫系统能力和器官造血功能。利用流式细胞仪检测 rLZ-8 对淋巴细胞分类的 + + + 作用，包括 B 细胞、CD4 、CD8 T 细胞，结果显示，rLZ-8 可以维持 CD4 T 和 CD8+ T 细胞之间的平衡，这对改善环磷酰胺引起的免疫功能损害和免疫系 统失衡将起到至关重要的作用。应用酶联免疫吸附法进行小鼠血清 IL-3、IL-4 细胞因子的测定，发现 rLZ-8 可以促进 IL-3、IL-4 在体内的分泌水平。提取小 鼠脾脏细胞RNA ，通过 RNA 标记和阵列杂交，获得基因芯片结果。结合统计 学分析、聚类分析、GO 分析和 Pathway 分析，得到 rLZ-8 在治疗白细胞减少 症过程中起到关键作用的基因：Akt2 、Txk、Plcb2 、Nfkb1 、Ppp2c 、Map2k1 。 本实验的创新之处在于：成功建立了两种小鼠白细胞减少症模型，首次证 明了 rLZ-8 可以同时增加各类白细胞数量，具有治疗白细胞减少症的药效学功 能。rLZ-8 促进免疫细胞增殖作用显著，提升了环磷酰胺诱导的白细胞减少症 小鼠的机体免疫能力，对改善环磷酰胺引起的免疫功能损害和免疫系统失衡起 到至关重要的作用。在国际上第一次实现了真菌免疫调节蛋白走向临床用药研 发的新途径。揭示了 rLZ-8 治疗白细胞减少症相关的信号转导通路及其分子， 为 rLZ-8 开发为临床用药提供了理论依据。     中文摘要  重组灵芝免疫调节蛋白对环磷酰胺致小鼠白细胞减少症 模型治疗及其机制研究 9 白细胞减少症是指人外周血白细胞绝对计数持续低于4.0×10 /L ，据其发病 原因可分为原发性和继发性两种，而继发于肿瘤放疗、化疗后的白细胞减少症 尤为常见。约 90%的癌症患者放疗、化疗后会出现以白细胞减少为主要症状的 骨髓抑制，并伴随频繁发热及粘膜的坏死性溃疡，个别合并严重感染出现败血 症、脓毒血症等症状，继而危及生命。环磷酰胺（CY ）是常用化疗药之一，是 细胞周期非特异性的广谱抗肿瘤药，通过与细胞的 DNA 发生烷化作用, 形成 交叉联结, 从而抑制肿瘤细胞的生长繁殖。但 CY 对肿瘤细胞和正常细胞的选 择性不高，对人体生长迅速的细胞如白细胞产生了许多副作用，因此，有效地 治疗因化疗而引起的白细胞减少症就显得尤为重要。目前市场上应用的升高白 细胞的药物有很多种，传统药物如维生素 B6 、利血生和鲨肝醇，新增药物如 细胞因子，其中包括重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF ）、重组人粒细胞- 巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF ）、白介素-11 （IL-11 ）。这些药物虽然可以 显著提升白细胞数量，但是不能从整体上提高机体的免疫水平，而且具有多种 不良反应，因此寻找一种既能增加白细胞数量又能全面提升机体免疫水平的药 物迫在眉睫。 几个世纪来，灵