以斑马鱼模型评价6种药物的神经毒性.pdfVIP

第33卷第5期 实验动物科学 VolI33 NO．5 2016年10月 LABORATORYANIMALSCIENCE October2016 垆驴痧痧匈 §研究报告§ 易驴、驴、西》驴圆 以斑马鱼模型评价6种药物的神经毒性术 兰小红 朱晓宇 张 勇 徐 雷 李春启 (杭州环特生物科技股份有限公司，杭州310000) 摘要：目的 以斑马鱼为模式生物，评价6种已知对人类具有神经毒药物吗替麦考酚酯、异烟肼、环孢素A、卡马西 平、苯妥英钠和乙醇对斑马鱼的神经毒性。方法 挑选受精后5d(5dpf)的野生型AB系斑马鱼在含吗替麦考酚 328 460、4866、14599和15 酯(4．5、15、45和51i．Lmol／L)、异烟肼(1 斗mol／L)、苯妥英钠(16．7、55．7、167和185 50Ixmol／L)的养鱼用水中暴露，实验过程中不做换液处理，24h后，利用斑马鱼行为分析仪检测斑马鱼的总运动距 离，评价6种药物对斑马鱼运动活力的影响；受精后1d(1dpf)的运动神经元转基因斑马鱼胚胎在含吗替麦考酚酯 (0．15、0．5、1．5和5．5 971、36596、109708和11l IxmolfL)、异烟肼(10 825卜mol／L)、卡马西平(45．9、153、459和 50 h后，在荧光显微镜下拍照，分析统计斑马鱼次级运 Immol／L)的养鱼用水中暴露，实验过程中不做换液处理，48 动神经元轴突的长度，评价6种药物对斑马鱼运动神经元轴突生长的影响。结果吗替麦考酚酯、乙醇、卡马西平 暴露后，随着浓度增加，斑马鱼运动距离先增加后减少，产生典型剂量依赖性倒“U”型运动；异烟肼和苯妥英钠暴 露后，随着浓度增加，对斑马鱼运动活力抑制作用逐渐增强；环孢素A暴露后，随着浓度增加，斑马鱼产生兴奋性， 斑马鱼总运动距离逐渐增加；6种药物作用后，斑马鱼运动神经元轴突长度均变短，表明6种药物在实验剂量下均 能抑制运动神经元轴突的生长。结论 斑马鱼模型可用于初步评价药物神经毒性。 关键词：斑马鱼；运动活力；运动神经元轴突 中图分类号：R一332文献标识码：A 文章编号：1006—6179(2016)05-0028-05 许多已经上市的药物由于不同程度的神经毒副 人员发现许多人类神经系统疾病相关的基因在斑马 作用，威胁着患者的生命安全，严重影响了药物的利 鱼中高度保守，如与神经嵴疾病相关的Phox2b基因 用，甚至最终导致药品退出市场，因此，早期神经毒 和对帕金森疾病有影响的UCH—L1基因’61；除此 性评价是药物风险性评估的重要内容。目前，神经 之外，与哺乳动物相比，斑马鱼具有体型小、产卵多、 毒性研究主要在哺乳动物上进行，但哺乳动物实验 发育快、易于饲养、繁殖周期短和实验成本低等特 存在实验周期长，药物用量大，费用高且存在动物福 点，符合“3R”(替代、减少、优化)原则，并且在发育 利、伦理等方面问题，严重阻碍了药物神经毒性研究 早期，斑马鱼胚胎通体透明，便于运用显微镜对其神 的进展。斑马鱼是一种小型亚热带淡水鱼类，近年 经细胞进行直接的观察研究，因此用斑马鱼进行神 来，被广泛作为脊椎动物模型而用于药物神经毒性 经毒性研究具有其他生物不可比拟的优势。吗替麦 的研究。斑马鱼作为神经生物学研究中一种常见的 考酚酯、异烟肼、环孢素A、卡马西平和苯妥英钠5 动物模型，首先，基因组测序表明斑马鱼基因与人类 种药物均为临床常用药物，具有不同程度的神经毒 基因的相似度达到87％¨。；其次，斑马鱼神经形成 性，乙醇为公认的具有神经毒性的试剂。