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阿特拉津和毒死蜱单一及联合暴露对鲤鱼脑组织自噬的影响
Classified Index: Code:10224
Confidential(yes/no):no NO.1006409
Dissertation for the Master Degree
Effects of Single and Joint Exposure of
Atrazine and Chlorpyrifos on Autophagy
in the Brain of Common Carp
Candidate: Wang Liangliang
Supervisor: Prof. Xu Shiwen
Degree Category: Master of Agriculture
College: Veterinary Medicine
First level discipline: Veterinary Medicine
Second level discipline: Clinical Vetetinary Medicine
Harbin China
June 2013
目 录
摘要 I
英文摘要III
1 引言1
1.1 阿特拉津和毒死蜱神经毒理学研究进展1
1.1.1 阿特拉津神经毒理学研究进展1
1.1.2 毒死蜱神经毒理学研究进展 2
1.2 自噬在毒理学研究中的作用研究进展3
1.2.1 自噬的检测方法4
1.2.2 自噬在毒理学研究中的作用研究进展5
1.3 目的与意义5
2 材料与方法6
2.1 试验鱼的驯养及暴露环境6
2.2 试验的总体设计6
2.2.1 暴露试验 6
2.2.2 恢复试验 6
2.3 样品的采集与处理6
2.4 主要仪器和试剂7
2.4.1 试验毒物 7
2.4.2 主要仪器 7
2.4.3 主要试剂 7
2.5 鲤鱼 LC3 和 dynein 基因的克隆、原核表达、多克隆抗体的制备 8
2.5.1 鲤鱼 LC3 和 dynein mRNA 基因序列的克隆与鉴定 8
2.5.2 鲤鱼 LC3 和 dynein 基因在大肠杆菌中的表达、纯化和鉴定10
2.5.3 抗鲤鱼 LC3 和 dynein 多克隆抗体的制备11
2.6 检测项目与方法12
2.6.1 组织抗氧化功能相关指标的检测12
2.6.2 组织超微结构的观察 12
2.6.3 脑自噬相关基因 mRNA 表达的检测13
2.7 试验数据分析与统计14
3 结果与分析15
3.1 鲤鱼 LC3 和 dynein 多克隆抗体的制备15
3.1.1 鲤鱼脑组织中总 RNA 的提取与鉴定15
3.1.2 鲤鱼 LC3 和 dynein 基因的 PCR 扩增结果 15
3.1.3 鲤鱼 LC3 和 dynein mRNA 基因序列的测序结果 16
3.1.4 重组表达载体的构建与鉴定 16
3.1.5 融合蛋白的表达、鉴定与纯化17
ii
3.1.6 多克隆抗体的制备和鉴定结果18
3.2 鲤鱼脑组织抗氧化功能的检测结果18
3.2.1 鲤鱼脑中一氧化氮水平的检测结果18
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