发育不同时期幼鼠脊髓中ZBTB-38基因的表达.pdfVIP

第36卷5期 安徽师范大学学报(自然科学版) V01．36No．5 201 3年9月 ofAnhuiNormal 13 Journal Science) 0 University(Natural Sep．2 发育不同时期幼鼠脊髓中ZBTB一38基因的表达 杨兰英1 蔡亚非1， 张 暄2， (1．安徽师范大学生命科学学院，生物环境与生态安全安徽省高校省级重点实验室，安徽芜湖241000；2．河南省淮滨县质量技术监督局白酒 监督检验测试中心，河南信日}464400) 摘要：为了探讨ZBTB一38基因在胚胎发育时期脊髓中的表达及其在脊髓结构中的表达定位，取 中，ZBTB一38阳性表达主要分布在灰质前角，并且随着发育的不同时期表达呈一定的动态变化， 在P5时开始上升，P15达到高峰，随后维持在一定的生理水平． 关键词：幼鼠；ZBTB一38基因；免疫组织化学；RT—PCR 中图分类号：Q426；Q955文献标识码：A andBTBdomain ZBTB～38(Zinc 38)基因是锌指蛋白家族中的一员，其N末端具有典 finger containing 表达谱分析和筛选，首次发现了CIBZ蛋白参与小鼠脊髓损伤的进程，研究还发现CIBZ蛋白在小鼠体内广 泛表达，肌肉组织表达量最高，其次为脊髓，再次为大脑．国外研究证实，ZBTB一38对于影响人类身高和形 态大小有明显的生物学作用，其通过调节IGF2的生成来影响成年人的形态大小心』．但到目前为止，在发育 不同时期研究ZBTB一38基因对脊髓发育及神经细胞凋亡所发挥的作用鲜有文献报道．本文通过免疫组织 律，为进一步探讨ZBq、B一38对生长发育及细胞凋亡的作用提供理论基础． 1材料与方法 1．1材料及组织准备 购自南京青龙山动物场昆明小白鼠(KM品系)，很据Nagy 组织，4C生理盐水冲洗干净后置于4％多聚甲醛固定液中固定24h，然后经梯度乙醇脱水、透明、浸蜡和包 烘干，备用于ZBTB一38免疫组化染色和阴性对照． PCR检测． 1．2实验试剂 APES、PBS及枸橼酸盐缓冲液，封闭液BSA等购白武汉博士德生物公司． EDTA，Tap酶等均购自上海生工． 收稿日期：2013—05—27 作者简介：杨兰英(1990一)，女，安徽涡阳人，硕士研究生．通讯作者：蔡亚非(1971一)，男，安徽泗县人，教授，博士． 36卷第5期 杨兰英，张暄，蔡亚非： 发育不同时期幼鼠脊髓中ZBTB-38基因的表达471 1．3幼鼠脊髓免疫组织化学染色 显色液室温显色20mi、；苏木精轻度复染45s．梯度乙醇脱水，透明，中性树胶封片，室温晾干，镜检．空白对照 以PBS取代一抗，其余方法一致． 1．4半定量RT—PCR实验技术 v6．0设计引物，优化退火温度并扩增得到预 泳检测其完整性，一70C保存备用．运用GenBank登录号，Oligo 1U 45s，56℃30s，72℃ ddI-120．反应程序：预变性94℃5min；94。C TapDNA聚合酶、上下游引物各2ul、16v．1 泳上检测．使用BandScanv5．0分析灰度值和染色面积，并计算目的基因的表达． 表1 RT—PCR扩增基因及其引物参数 ’Fablel RT—PCRof and genes Semi-quantitative primersparameters