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微生物学的重点知识 1676年，微生物学的先驱荷兰人列文虎克（Antony van leeuwenhoek，微生物的发现者）首次观察到了细菌。 1、法国人巴斯德（Louis Pasteur）（1822～1895） (1) 发现并证实发酵是由微生物引起的； (2) 彻底否定了“自然发生”学说：著名的曲颈瓶试验无可辩驳地证实，空气内确实含有微生物，是它们引起有机质的腐败； (3) 免疫学——预防接种：巴斯德研究了几种对人类和牲畜危害很大的疾病，如鸡瘟、牛羊炭疽病、人的狂犬病等，并发现引起这些病害的病原体，制成疫苗，用以预防和治疗疾病，为免疫学奠定基础。（挽救了许多人、畜生命）。 (4)其他贡献 如巴斯德消毒法：60～65℃作短时间（15-20min）加热处理，杀死有害微生物的方法。 2、德国人柯赫（Robert Koch）（1843～1910） （1）微生物学基本操作技术方面的贡献 a）细菌纯培养方法的建立；b）设计了各种培养基，实现了在实验室内对各种微生物的培养；c）流动蒸汽灭菌；d）染色观察和显微摄影； （2）对病原细菌的研究作出了突出的贡献 a）具体证实了炭疽杆菌是炭疽病的病原菌；b）发现了肺结核病的病原菌（1905年获诺贝尔奖）；c）证明某种微生物是否为某种疾病病原体的基本原则——著名的柯赫原则 （四）微生物学发展过程中的重大事件 1928 Griffith 发现细菌转化；1929 Fleming 发现青霉素；1953 Watson和Crick提出DNA双螺旋结构； 1977 Woese 提出古生菌是不同于细菌和真核生物的特殊类群；1982～1983 Prusiner发现朊病毒(prion)；1995 第一个独立生活的细菌(流感嗜血杆菌)全基团组序列测定完成；1997 第一个真核生物 (啤酒酵母) 基因组测序完成。汤飞凡：沙眼病原体的分离和确证（国际领先）； 2、保藏技术使其在一定时间内不死亡 不会被其他微生物污染，不会因发生变异而丢失重要的生物学性状。 3、决定显微镜效果的三大因素：放大；分辨率（能辨别两点之间最小距离的能力）；反差（被观察物区别于背景的程度）。 4、不同显微镜物镜的分辨率：搜索物镜：2.3um 低倍镜：0.9um 高倍镜：0.35um 油镜：0.18um 5、不具细胞结构的病毒、类病毒， 6、细菌的形态可分为：球状、杆状、螺旋状三种。 7、根据菌丝的形态和功能可分为：营养菌丝、气生菌丝和孢子丝三种。 8、四肽尾的第3个氨基酸不是L-Lys,而是被一种只有在原核微生物细胞壁上才有的内消旋二氨基庚二酸所代替。 9、革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的细胞壁结构有什么异同？各有哪些化学组成？答：革兰氏阳性菌细胞壁厚约20-80nm，结构较简单，含肽聚糖，革兰氏阴性菌细胞壁厚约10nm，结构复杂，分外壁层和内壁层，外壁层又分三层：最外层是脂多糖，中间是磷脂层，内层是脂蛋白。内壁含肽聚糖，不含磷壁酸。化学组成：革兰氏阳性菌含大量肽聚糖，含独磷壁酸，不含脂多糖。革兰氏阴性菌含极少肽聚糖，含独脂多糖，不含磷酸壁。 10、叙述革兰氏染色的机制和步骤。答：将一大类细菌染上色，而另一类染不上色，一边将两大类细菌分开，作为分类鉴定重要的第一步。其染色步骤如下：1在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，固定。2用草酸铵结晶紫染色1min，水洗去掉浮色。3用碘—碘化钾溶液媒染1min，倾去多余溶液。4用中型脱色剂如乙醇或丙酮酸脱色，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色。革兰氏阴性菌被褪色而成无色5用蕃红染液复染1min，格兰仕阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色。革兰氏阳性菌和格兰仕阴性菌即被区分开。 11、微生物的五大共性 （1）体积小、面积大；（2）吸收多、转化快；（3）生长旺、繁殖快；（4）适应强、易变异；（5）分布广、种类多。 12、芽孢的耐热性在于芽孢衣对多价阳离子和水分的透性很差和皮层的离子强度很高，从而使皮层产生极高的渗透压去夺取芽孢核心中的水分，其结果造成皮层的充分膨胀，而核心部分的细胞质却变得高度失水，因此，导致核心具极强的耐热性 13、生长因子分为：氨基酸、维生素、嘧啶和嘌呤 14、配置培养基的原则和方法 1）、选择适宜的营养物质； 实验室的常用培养基： 细菌：牛肉膏蛋白胨培养基（或简称普通肉汤培养基）；放线菌：高氏1号合成培养基；酵母菌：麦芽汁培养基；霉菌：查氏合成培养基； 2）、营养物的浓度及配比合适：C/N3）、控制pH条件4）、控制氧化还原电位5）、原料来源的选择6）、灭菌处理 15、培养基的类型及应用 1．按成份不同划分： 1）天然培养基(complex medium)：2）合成培养基(synthetic medium)： 2．根据物理状态划分：固体培养