硫氧还蛋白f介导的烟草Rubisco活化酶氧化还原调控的初步研究（Preliminary study on redox regulation of tobacco Rubisco activating enzymes mediated by thioredoxin f）.pdfVIP

论文题目：硫氧还蛋白 f 介导的烟草 Rubisco 活化酶氧化还原调控的初步研究 学科专业：植物学 学位申请人：孙逸 指导教师：马为民 中文摘要 中文摘要 中文摘要中文摘要 1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶（Rubisco）既催化 RuBP 的羧化反应又催化 其加氧反应，是影响植物净光合速率高低的一个关键酶。然而它的催化效率却很 低，除此之外它在体内还需要 Rubisco 活化酶对其进行活化。近年人们发现，以 拟南芥为代表的，含有大（α）和小（β）双亚基 Rubisco 活化酶在植物体内是 通过其α亚基和硫氧还蛋白 f 接受氧化还原调控。但是以烟草为代表的，仅含有 β亚基的植物是否通过硫氧还蛋白接受氧化还原调控还没有相关报告。通过对烟 草和拟南芥等来源的 Rubisco 及其活化酶的氧化还原调控的研究，初步得出以下 2 个结论： 1. 验证了烟草 Rubisco 的活力也受氧化还原调控，而且硫氧还蛋白f 介导了 烟草 Rubsico 活化酶的氧化还原调控。通过从叶片提取和原核表达的方法分别获 得拟南芥和烟草的硫氧还蛋白 f 以及烟草的 Rubisco 活化酶，通过在不同条件下 测定烟草与拟南芥 Rubisco 活化酶的表面巯基数变化、活化 Rubisco 活力和 ATP 水解酶活性，结果表明仅含有β亚基的烟草 Rubisco 活化酶也与其他具有双亚基 的 Rubisco 活化酶相似，也通过硫氧还蛋白 f 接受氧化还原调控。这与之前学者 的论断是完全不同的（Zhang 等，2001 ）。 2. 硫氧还蛋白 f 对 Rubisco 活化酶的氧化还原调控与 Rubisco 活力调控一样 具有种属特异性。 烟草的硫氧还蛋白 f 只能对单亚基的活化酶进行氧化还原调 控，而拟南芥的硫氧还蛋白只能对双亚基的 Rubisco 活化酶进行氧化还原调控。 通过对 Rubisco 活化酶的序列比对，我们发现 Rubisco 活化酶 335 、359、378 位 点的氨基酸位点在种属之间分别是保守的，在 335 位点上，双亚基物种的 RCA 都是甲硫氨酸（ ），而单亚基物种 RCA 都是亮氨酸（L）。在 359 位点上，双亚 基物种的 RCA 都为丝氨酸（S ）,单亚基物种的 RCA 番茄和烟草都为赖氨酸（K）, 玉米为天冬酰胺（N）。在 378 位点，双亚基物种 RCA 为甘氨酸（G ），而单亚基 物种 RCA 却各有差异：番茄为苏氨酸（T ），烟草为丙氨酸（A ），玉米为赖氨酸 （K）。在此基础上，我们对拟南芥的 Rubisco 活化酶上述位点进行突变，将其替 代为烟草中的氨基酸残基，结果发现 335 位点上的拟南芥 RCA 位点被替代后， 其 ATP 水解酶活性在烟草硫氧还蛋白 f 存在的情况下，还原状态下 ATP 水解酶活 性增加 33% （氧化状态下，活性下降30% ），说明烟草 Rubisco 活化酶的 L335 位 点氨基酸残基可能与 Rubisco 活化酶种属特异性有关，但是具体的机制需要进一 步的研究。 关键词：关键词：烟草;Rubisco;Rubisco 活化酶;硫氧还蛋白 f;氧化还原调控 关键词关键词：： Abstract Ribulose-1, 5-bisphosphate carboxylase/oxygenase (Rubisco) is the key enzyme which catalyzes the first step reaction of both photosyntheti