肠道菌群中鼠李糖乳杆菌的菌落免疫印迹计数与分离.pdfVIP

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2016, Vol.32, No.7 肠道菌群中鼠李糖乳杆菌的菌落免疫 印迹计数与分离 1,2 1 3 1 1 1 1 1 杨振泉 ，贡湘磊 ，叶平 ，谢鑫 ，张宇 ，高璐 ，饶胜其 ，尹永祺 （1.扬州大学食品科学与工程学院，江苏扬州 225127）（2.江苏省乳品生物技术与安全控制重点实验室，江苏扬 州 225127）（3.泰州市产品质量监督检验所,江苏泰州 225309） 摘要：本研究通过制备鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus ，Lr)菌毛蛋白FimI 特异性抗体，建立了 Lr 菌落免疫印迹计数与分 离方法。将重组FimI 蛋白（rFimI ）免疫BALB/c 小鼠获得抗血清，用Western 和全菌 Dot-Blot 鉴定抗血清的反应性和特异性，建立 基于 rFimI 抗血清的菌落免疫印迹方法，并对模拟样品（小鼠肠道菌群+Lr ）以及灌胃小鼠粪便中的Lr 进行定量分析。结果显示获得 的rFimI 抗血清效价为 1:51200，该血清和 Lr 裂解蛋白和菌体均呈强阳性反应，与小鼠肠道菌群没有交叉反应。菌落免疫印迹中rFimI 抗体最佳浓度为 1:2000，所有含有Lr 样品的菌落转印膜上都能呈现清晰的免疫印迹，测定的阳性菌落数和模拟样品中预设的 Lr 浓度 一致，并能较好的反应灌服 Lr 的小鼠粪便中Lr 的消长趋势。本研究建立的菌落免疫印迹方法为肠道样品中Lr 的选择性计数和分离 提供了快捷的方法。 关键词：鼠李糖乳杆菌；菌落免疫印迹；计数；分离 文章篇号：1673-9078(2016)07-60-65 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2016.7.010 Application of Colony Immunoblotting for Counting and Isolating Lactobacillus rhamnosus in Intestinal Flora 1,2 1 3 1 1 1 1 1 YANG Zhen-quan , GONG Xiang-lei , YE Ping , XIE Xin , ZHANG Yu , GAO Lu , RAO Sheng-qi ,YIN Yong-qi (1.College of Science and Engineering, Yangzhou University, Yangzhou 225127, China) (2.Jiangsu Key Laboratory of Dairy Biotechnology and Safety Control, Yangzhou 225127, China) (3.Product Quality Supervising and Inspecting lnstitute of Taizhou City, Taizhou 225309, China) Abstract: A specific antibody against pilus protein (FimI) of Lactobacillus rhamnosus (Lr) was prepared, to develop a colony immunoblotting (CIB) counting and isolation method