中国明对虾溶菌酶基因克隆、重组表达及性质分析.pdfVIP

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2017-10-07 发布于安徽
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中国明对虾溶菌酶基因克隆、重组表达及性质分析.pdf

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生物工程学报 Chin J Biotech 2008, May 25; 24(5): 723-732 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 研究报告中国明对虾溶菌酶基因克隆、重组表达与性质分析 1, 2 1 3 1 1 卜兴江 , 杜欣军 , 周文杰 , 赵小凡 , 王金星 1 山东大学生命科学学院, 济南 250100 2 安徽师范大学生命科学学院, 芜湖 241000 3 衡水学院生命科学系, 衡水 053000 摘要: 溶菌酶是机体先天免疫系统中一个重要的效应分子, 参与机体多种免疫反应, 在溶菌过程中形成一个水解体系, 破坏和消除侵入体内的病原, 从而实现机体的免疫防御。从中国明对虾中克隆得到了溶菌酶基因(称为FcLyz 基因), 该基因全长709 bp, 其完整的阅读框为477 bp, 编码 158 个氨基酸, 前 18 个氨基酸(−1~−18)为信号肽, 成熟肽由 140 个氨基酸组成(1−140aa), 其分子量为 16.2 kD。经SMART 分析，该基因具有 1 个溶菌酶 1(LYZ1)结构域(19−130aa)。半定量RT-PCR 分析结果表明溶菌酶虽在多种组织中有较低水平的组成性表达, 但在细菌诱导的血细胞、心脏、肝胰腺和鳃等多种组织中表达上调。将中国明对虾溶菌酶基因的成熟肽亚克隆进原核表达载体 pET-30a (+) 中, 转化大肠杆菌 BL21(DE3), 再进行诱导表达和亲和纯化, 得到了纯化的重组溶菌酶, 并进行了抑菌活性检测。结果表明, 重组对虾溶菌酶对革兰氏阳性菌的抑菌能力较强, 最小抑菌浓度达到 3.43 μmol/L, 但对革兰氏阴性菌抑制作用较小。上述结果表明, 该溶菌酶作为一种重要的免疫效应分子, 参与了对虾的免疫防御反应。关键词: 中国明对虾, 溶菌酶, 先天免疫, 重组表达 Molecular Cloning, Recombinant Expression and Characterization of Lysozyme from Chinese Shrimp Fenneropenaeus chinensis 2 1 3 1 1 Xingjiang Bu , Xinjun Du , Wenjie Zhou , Xiaofan Zhao , and Jinxing Wang 1 School of Life Sciences, Shandong University, Jinan 250100, China 2