芽再生过程中微丝骨架通过调节生长素的极性运输影响干细胞的再生.pdfVIP

符 号 说 明 2,4-D: 2,4-dichlorophenoxyacetic acid, 2,4-二氯苯氧乙酸 2-IP: 2-isopentenyladenine, 异戊烯基腺嘌呤 6-BA: 6-benzylaminopurine, 6-苄氨基腺嘌呤 Amp: ampicillin, 氨苄青霉素 ARF: ADP-ribosylation factor ADP, 核糖基化因子 CaMV35S: promoter of cauliflower mosaic virus, 花椰菜花叶病毒启动子 CIM: callus-inducing medium, 愈伤诱导培养基 DEPC: diethyl pyrocarbonate, 焦碳酸二乙酯 EB: ethidium bromide, 溴化乙锭 Estradiol: 17-β-estradiol, 17-β-雌二醇 GA: gibberellic acid, 赤霉素 GEFs: Guanine-nucleotide exchange factors, 鸟苷酸交换因子 GUS: glucuronidase, β-葡糖苷酸酶 IAA: indole-3-acetic acid, 吲哚乙酸 Kan: kanamycin, 卡那霉素 KT: kinetin, 激动素 qRT-PCR: real time quantitative reverse transcerption PCR, 实时定量反转录 PCR SAM: shoot apical meristem, 茎端分生组织 SIM：shoot induced medium, 芽再生培养基 SDS: sodium dodecyl sulfate, 十二烷基硫酸钠 Spe: spectinomycin, 壮观霉素 TE: Tris·HCl, EDTA buffer, Tris·Cl, EDTA 缓冲液 Tris: trishydryxymethy laminomethane, 三羟甲基氨基甲烷 WT: wild type, 野生型 目 录 中文摘要 1 英文摘要 3 1 前言 5 1.1 植物芽的再生 5 1.1.1 芽再生体系的建立 5 1.1.2 芽再生过程中干细胞的重新形成 6 1.1.3 生长素在芽再生过程中的作用 7 生长素在植物发育中的作用 7 生长素的极性运输 8 生长素在芽再生过程中的作用 9 1.2 微丝细胞骨架在植物发育中的作用 10 1.2.1 微丝细胞骨架的组成 10 1.2.2 微丝骨架的基本功能及研究方法 10 1.2.3 微丝骨架在植物发育中的作用 12 1.2.4 微丝解聚因子 ADF 在植物发育中的作用 12 1.3 微丝骨架与生长素之间的关系 13 1.4 本实验的目的意义 16 2 材料与方法 17 2.1 实验材料 17 2.1.1 植物材料及生长条件 17 2.1.2 酶与各种生化试剂 17 2.1.3 菌株与质粒 17 2.1.4 PCR 引物 17 2.2 实验方法 19 2.2.1 拟南芥的种植与培养 19 2.2.2 拟南芥离体芽的培养 19 2.2.3 表达载体的构建及其转化拟南芥 19 PCR 扩增 19 连接反应 20 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 20 碱法小量质粒 DNA 的提取 21 质粒 DNA 的酶切鉴定 22 DNA 序列测定 22 诱导型 artificial microRNA 沉默ADF 基因表达载体的构建 22 农杆菌 GV3101 感受态细胞的制备与转化 25 拟南芥的转化 26 2.2.4 植物组织总 RNA 的提取与纯化 26 Trizol 法提取总 RNA 26 RNA 中基因组DNA 的去除 27 2.2.5 反转录 cDNA 第一链的合成 27 2.2.6 实时定量 PCR 28 2.2.7 植物基因组 DNA 的提取 29 2.2.8 植物基因组 DNA 的纯化 29 2.2.9 转基因植物 GUS 组织化学染色分析 30 2.2.10 冰冻切片的制备 30 样品固定 30 冰冻包埋 31 回温处理 31 切片 31 展片 31 封片及观察 31 2.2.11 共聚焦显微镜观察和图像处理 31 3 结果与分析 33