特殊细胞培养技术.pdf

特殊细胞的培养技术 特殊细胞的培养技术 ustcwhm@ustc.edu.cn 1 主要内容 主要内容 一、二倍体细胞原代培养技术 二、肿瘤细胞原代培养技术 三、细胞系/细胞株培养技术 四、细胞大规模培养技术 五、一些重要的细胞系 2 一、二倍体细胞原代培养技术 也称初代培养 ，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持 续1一4周。此期细胞呈活跃的移动，可见细胞分裂，但不旺盛。初代培 养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。细胞群是异质 的（Heterogeneous），也即各细胞的遗传性状互不相同，细胞相互依 存性强。如把这种细胞群稀释分散成单细胞，在软琼脂培养基中进行培 养时，细胞克隆形成率（Cloning Efficiency）很低，即细胞独立生存 性差。克隆形成率即细胞群被稀释分散成单个细胞进行培养时，形成细 胞小群（克隆）的百分数。初代培养细胞多呈二倍体核型；由于原代培 养细胞和体内细胞性状相似性大，是检测药物很好的实验对象。 3 二倍体细胞： 细胞群染色体数目具有与原供体二倍细胞染色体数相同或基本相同 （2n细胞占75％或80％以上）的细胞群，称二倍体细胞培养。如仅 数目相同，而核型不同的即染色体形态有改变者为假二倍体。二倍体 细胞在正常情况下具有限生命期，故属有限细胞系。但随供体年龄和 组织细胞的不同，二倍体细胞的寿命长短各异。人胚肺成纤维细胞可 传50代土10代，人胚肾只有8～10代，人胚神经胶质细胞15～30代。 由不同年龄供体取材建立的二倍体细胞系可供研究衰老之用。为保持 二倍体细胞能长期被利用，一般在初代或2～5代即大量冻存作为原种 （StookCells），用时再进行繁殖，用后再继续冻存，可供长期使 用或延缓细胞的衰老。 4 消化法原代培养 5 组织块原代培养 6 新生SD大鼠肺成纤维细胞（原代）： 1.细胞种类：鼠肺成纤维细胞； 2.培养的天数：48h； 3.放大倍速：倒置显微镜 X40； 4.培养基种类：RPMI1640+10%小牛血清； 5.细胞状态与特征简述：细胞呈梭形，有伪足，边缘清晰整齐，贴壁生长。 7 幼兔骨髓基质干细胞（原代）： 1.细胞种类：幼兔骨髓基质干细胞； 2.培养的天数：五天后； 3.放大倍速：倒置显微镜 X40； 4.培养基种类：DMEM+20%胎牛血清； 5.细胞状态与特征简述：细胞呈梭形，有伪足，边缘清晰整齐，贴壁生长。 8 幼兔骨髓基质干细胞（第一代）： 1.细胞种类：幼兔骨髓基质干细胞； 2.培养的天数：传代后十天； 3.放大倍速：倒置显微镜 X40； 4.培养基种类：DMEM+10%胎牛血清； 5.细胞状态与特征简述：细胞呈梭形，有伪足，边缘清晰整齐，贴壁生长。 9 BioCoat Insert系列 Biocoat 细胞培养小室是经过细胞外基质（胶原Ⅰ型、胶原Ⅳ型、 纤维胶原、纤维粘连蛋白、层粘连蛋白）包被的培养小室。细胞接种到 小室底部PET膜上后，嵌入孔板浸培