水稻花药和花粉培养-整理版.ppt

* 　 中国.中学政治教学网崇尚互联共享 水稻花药和花粉培养 2010.6.28 目录 研究进展 研究过程 研究意义 前景展望 一 研究进展 1.水稻单倍体获得途径 花药培养、花粉培养 胚珠或子房培养（未受精） 概念： 单倍体育种：通过花药、花粉培养获得单倍体，然后进行染色体加倍，经过选择、鉴定选育出新品种的途径。 花药培养：是将花粉发育至一定阶段的花药接种到人工培养基上进行培养，以形成花粉胚或愈伤组织进而分化成植株的技术。 花粉培养：是将花粉从花药中分离出来,接种到人工培养基上进行培养，以形成花粉胚或愈伤组织进而分化成植株的过程。 水稻花培历史： ?1968年，日本人新关和大野首次通过水稻花药培养获得单倍体植株； ?1970年，我国正式开展水稻花药培养技术研究，并取得良好进展； ?截至目前，已有多个品种通过花培途径获得。代表成果：天津农科院选育的花育“花育1号”、“花育2号”；中国农科院选育的中花系列；黑龙江农科院水稻所选育的龙粳系列品种。 ?截至目前，通过花培选育出了很多粳稻品种并大面积的推广应用。1975-1998共审定26个品种。 ?籼稻花药培养难度较大。至20世纪末，共有5个品种通过花陪选育。 二 研究过程 1.培养流程 2.培养方法 3.影响因素 4.检测方法 1.培养流程 花药和花粉培养基本流程： 预处理花药（物理或生理逆境） 收集具胚性小孢子的花药，或离心收集胚性小孢子 培养（充足的营养、合适的温光、或条件培养）形成胚状体 胚状体转移至固化培养基上”萌发”形成小植株。 选择合适的供体植株 倍性鉴定或染色体加倍 2.培养方法 花药培养 1、取材 镜检，根据花粉的发育时期，选取大小适宜的花蕾。 2、消毒 70％酒精擦洗花蕾表面，或70％酒精浸泡30-60s后在1％次氯酸钠溶液中浸泡10-20min或在0.1％的氯化汞溶液中消毒3-10min，无菌水冲洗3-5次。 3、培养 固体或液体培养基均可。先进行脱分化培养，至小孢子大量分裂形成胚或愈伤，并突破花药壁表面，形成突出物（2-3周）；后转入分化培养基培养，形成小植株。 水稻花药培养由接种至长出愈伤图 花粉培养 与花药不同，花粉培养需进行花粉的分离与纯化及特殊的花粉诱导培养。 分离和纯化方法 1、自然散落法(漂浮培养散落小孢子收集法) 将花药接种在预处理液或液体培养基上，待花粉自动散落后，收集培养。 2、挤压法 在烧杯或研钵中挤压花药，将花粉挤出后收集培养。 3、机械游离 （1）磁搅拌法 用磁力搅拌器搅拌培养液中的花药，使花粉游离出来； （2）超速旋切法 通过搅拌器中的高速旋转刀具破碎花蕾、穗子、花药，使小孢子游离出来（此法应用最广）。 4、小孢子纯化 对上述方法获得的小孢子混合物进行分级过筛、梯度离心处理纯化小孢子 小孢子梯度离心前后比较 梯度离心前 （小孢子形态、活力不一致） 30%蔗糖梯度离心后 （获得均一的小孢子群体） 花粉培养方式 1、平板培养 花粉置琼脂固化培养基上培养。 2、液体培养 花粉悬浮在液体培养基中培养，需震荡，以利通气。 3、双层培养 花粉置固体-液体双层培养基上培养。培养基制作方法：先铺一层琼脂固体培养基，凝固后，在表面加入少量液体培养基。 4、看护培养 利用花药或花药愈伤组织释放出的活性物质促进花粉小孢子发育。 5、微室培养 利用小的盖玻片和凹穴载玻片形成微室进行花粉培养 6、条件培养基培养 利用培养过花药的液体培养基或含失活花药提取物的培养基上培养。花药条件培养基、子房条件培养等。 3.影响因素 （1）基因型 植物基因型是影响雄核发育的最重要的因素之一。同一物种中的不同基因型对小孢子离体诱导反应差异较大。 如在水稻中，籼稻花粉培养力远低于糯稻，且在同一亚种范围内，不同品种间也存在很大差异。 （2）培养基和激素配比选择 应用于水稻花培的基本培养基种类较多， 如N6、 马铃薯培养基、 L8、 SK3、 土豆培养基、Miller、 合5、 通用、 LS、 White、 MS、 M8和改良M8等。同一材料用不同的培养基培养， 表现出不同的花培效果。 培养基 三明市农科所生物技术中心以M8、 N6和NB培养基， 进行了不同水稻品种材料花培观察比较试验， 结果从出愈率、 绿苗分化率两者比较， 还是M8 培养基较适合。 冯双华等用M8、 合5和改良M8做基本培养基， 以籼型杂交