第15章 新型流式细胞仪应用简介.ppt

第六节 流式细胞仪的应用 六、FCM对自身免疫性疾病HLA抗原的分析 利用FCM可以进行HLA-B27／HLA-B7 双标记抗体检测HLA-B27阳性细胞，同时 又可排出交叉反应。通常58％～97％的 强直性脊柱炎患者可检出这种抗原，而 正常人仅2％～7％可检出这种抗原。FCM 检测HLA-B27快速、特异、敏感，为强直 性脊柱炎的临床诊断提供了有力的帮助。 第六节 流式细胞仪的应用 七、流式细胞仪在药物学方面的应用 流式细胞仪在检测药物在细胞中的分 布，研究药物的作用机制方面应用广泛。 亦可用于筛选新药，如化疗药物对肿瘤细 胞的凋亡机制，可通过测DNA凋亡峰， Bcl-2凋亡调节蛋白等进行观察。 本章小结 本章简要介绍了流式细胞术和流式细胞仪的基本概念。 论述了流式细胞仪的基本原理、流式细胞仪的分类和基本结构、主要性能指标、操作技术的质量控制、流式细胞仪的维护及常见故障的排除以及流式细胞仪的临床应用。 本章小结 将悬浮分散的单细胞 悬液，经特异荧光染料染 色后，放人样品管。在气 体压力的作用下，悬浮在 样品管中的单细胞悬液形 成样品流垂直进入流式细 胞仪的流动室，染色的细 胞受激光照射后发出荧光， 同时产生光散射。 本章小结 经过转换器转换为电子信号后，经模 ／数转换输入计算机。计算机通过相应的 软件储存、计算、分析这些数字化信息， 就可得到细胞的大小、活性、核酸含量、 酶和抗原的性质等物理和生化指标。 本章小结 当某类细胞的特性与 要分选的细胞相同时，流 式细胞仪就会在这类细胞 形成液滴时给含有这类细 胞的液滴充以特定的电荷， 带有电荷的液滴向下落入 偏转板间的静电场时，依 所带电荷的符号分别向左 偏转或向右偏转，落入指 定的收集器内。 本章小结 流式细胞仪根据功能 不同可分为临床型(亦称 台式机)和科研型（亦称 大型机）。流式细胞仪根 据其结构不同又可分为一 般流式细胞仪和狭缝扫描 流式细胞仪。 本章小结 流式细胞仪的结构可 分为流动室及液流驱动系 统；激光光源及光束成形 系统；光学系统；信号检 测与存贮、显示、分析系 统；细胞分选系统等五个 部分。 本章小结 流式细胞仪的主要性能指标包括：灵敏度、 仪器的分辨率、分析速度和分选指标。 流式细胞分析仪器是一项集多学科知识 综合应用的复杂仪器，在技术要求、质量控 制以及使用和维护方面都有严格的规定。 本章小结 流式细胞术是在单细胞分析和分选 基础上发展起来的一种新的细胞参数计 量技术。流式细胞仪是近年来发展起来 的现代细胞学分析技术中的常用仪器。 它具备快速、准确、量化等特性。目前 已经广泛应用于临床医疗实践和科学研 究中的免疫学、细胞生物学、血液学、 肿瘤学、药物学等诸多领域。 第二节 流式细胞仪的结构 四、信号检测与分析 2.荧光信号 （1）荧光信号线性测量和对数测量 线性放大器的输出与输入是线性关系， 细胞DNA含量、RNA含量、总蛋白质含量等 的测量一般选用线性放大测量。对细胞膜 表面抗原等参数进行荧光检测时，通常使 用对数放大器。 第二节 流式细胞仪的结构 四、信号检测与分析 2.荧光信号 （2）荧光信号的面积和宽度 荧光信号的面积是采用对荧光光通量进 行积分测量，一般对DNA倍体测量时采用 面积，这是因为荧光脉冲的面积比荧光 脉冲的高度更能准确反映DNA的含量。 荧光信号的宽度常用来区分双连体细胞。 第二节 流式细胞仪的结构 四、信号检测与分析 2.荧光信号 （3）光谱重叠的校正 当细胞携带两种荧光受激光激发而发 射两种不同波长的荧光时，理论上可选择 滤片使每种荧光仅被相应的检测器检测， 但由于目前所使用的各种荧光染料都是宽 发射谱性质，虽然它们之间发射峰值各不 相同，但发射谱范围有一定的重叠。 第二节 流式细胞仪的结构 从右图中可以看 出，阴影为探测器检 测光谱的范围，FITC 探测器会探测到少量 的PE光谱，而PE探测 器则检测到较多的 FITC光谱。 第二节 流式细胞仪的结构 图中点A通过透镜f 成像在A’处，而点B通 过透镜f成像在B’处。 在光电倍增管前放上一 小孔，作为空间滤波器， 排除其