稳定表达Wnt3a 基因的猪胰腺干细胞株的建立.pdfVIP

Online system: http://www.j 农业 生 物 技 术 学 报 Journal of Agricultural Biotechnology 2012, 20(11): 1300~1305 DOI: 10.3969/j. issn.1674-7968.2012.11.009 研究报告 Letter 稳定表达Wnt3a 基因的猪胰腺干细胞株的建立 彭莎1,2* 张军林1,2 1 西北农林科技大学动物医学院，杨凌712100；2 陕西省干细胞工程技术研究中心，陕西省农业分子生物学重点实验室，杨凌712100 * 通讯作者，pengsha 123@ ， 要 Wnt3a 是经典Wnt 通路上游的一个重要分泌蛋白 Wnt3a 蛋白的活化可 进多种细胞的增殖 和分裂。为了揭示Wnt3a 在猪胰腺干细胞(PSC)增殖及分化中的调控机理，采用RT-PCR 从pGKS2P(+) - Wnt3a 质粒中扩增出Wnt3a 全长片段，将测序正确的Wnt3a 连接到带有水母绿色荧光蛋白(AcGFP 1) 报告基因的真核表达载体pIRES2-AcGFP1 中，构建重组质粒。经EcoR / BamH 酶切鉴定后，用脂质 体转染至猪PSC 。用抗生素G418 筛选3 周后获得稳转pIRES2-AcGFP1- Wnt3a 的细胞株。荧光显微镜 。 ，稳转 下观察到几乎所有细胞表达绿色荧光蛋白 RT-PCR 和Western blot 的结果显示 Wnt3a 组的猪 PSC 中Wnt3a mRNA 及蛋白表达水平比对照组明显升高。这些结果表明，稳定表达Wnt3a 的猪胰腺干 细胞株成功建立，为进一步研究Wnt3a 在猪PSC 增殖及分化中的作用机理提供了 础资料。 关键词 Wnt3a，pIRES2-AcGFP1 ，重组质粒，胰腺干细胞(PSC) Establishment of Pocine Pancreatic Stem Cells Strain Stably Expressing Wnt3a PENG Sha1,2* ZHANG Jun-Lin1,2 1 College of Veterinary Medical, Northwest Agriculture and Forestry University, Yangling 712100, China; 2 Shaanxi Stem Cell Engineering and Technology Research Center, Shaanxi Key Laboratory of Molecular Biology for Agriculture, Northwest Agriculture and Forestry University, Yangling 712100, China *Corresponding author, pengsha123@ Abstract Wnt3a is an important secreted protein of the canonical Wnt pathway and its activation can promote cell proliferation and division. In order to reveal the roles of Wnt3a in regulating the proliferation and differentiation towards insulin-secreting cells of porcine pancreatic stem cells (P