大肠杆菌培养与分离第一课时.pptVIP

注意事项： 1.培养基灭菌后，需要冷却到60 ℃左右时，才能用来倒平板 2.灭菌及消毒：无菌操作台用超净紫外灯和过滤风灭菌；桌面及人手用酒精棉球消毒 3.操作时右手无名指和小指夹住封口膜,另外三指持三角瓶,左手拿培养皿并打开上盖的一边,在酒精灯火焰旁操作. 4.需要使锥形瓶的瓶口通过火焰，灼烧灭菌 5.平板冷凝后，要将平板倒置,既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染. 3、大肠杆菌的扩大培养 将斜面上培养的大肠杆菌菌种接种到灭菌后的液体培养基中,使其在37℃摇床培养12小时。 注意事项: 1.火焰旁从斜面上用接种环取菌; 2.取菌前接种环要用酒精灯灼烧 灭菌,冷却后方能取菌; 3.取菌后封口膜和棉塞复原. 4、划线分离 5、大肠杆菌分离后保存 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法 1.如何操作才可以尽量避免被杂菌污染? (1)胆大心细，操作快捷。 （2）注意灭菌操作原则，灭菌彻底，降低环境污染概率。 （3）注意微生物生长条件，如PH、渗透压、温度等。细菌喜碱，喜蛋白质，喜37度；霉菌喜酸，喜糖，喜25-30度 2.在培养后如何判断是否有杂菌污染? （1）菌落的形态看，是否湿润，透明，粘稠，颜色等。是区别细菌、酵母、放线菌和霉菌关键指标。 （2）显微镜观察其形态、大小、看是否有菌丝、孢子、芽孢。是区别细菌、酵母、放线菌和霉菌关键指标。 （3）上述方法较难区别同类的不同物种，需借助化学和进一步的形态观察，如用革兰氏染色法等。 3.进行恒温培养时为什么要将培养皿倒置? 恒温培养时，培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒放培养皿则会使水蒸气凝结成水滴留在盖上；如果正放，则水分形成的水滴会落入培养基表面并扩散开。如果培养皿中已形成菌落，则会导致菌随水扩散，很难再分成单菌落，达不到分离目的。 4.实验完成后,接种过细菌的器皿应如何处理? 所有接触过菌的器皿都要先高压灭菌后再洗涤（特别是培养基）； 使用后的废弃物也要高压灭菌后再抛弃 5.如果分离的是转基因的大肠杆菌,如何保证不被普通的大肠杆菌所污染? 转基因用的质粒不是细菌中原有的，而是经过改造的，通常加入了抗性基因的DNA序列，所以可用含有相应抗生素的培养基对菌体进行培养。 【课堂练习】 例1．关微生物营养物质的叙述中，正确的是（ ） A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量 D 例2．下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是（ ） A.防止杂菌污染 B.接种前菌种要进行灭菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前 B 编号 成分 含量 ① 粉状硫 10g ② （NH4）2SO4 0.4g ③ K2HPO4 4.0g ④ MgSO4 9.25g ⑤ FeSO4 0.5g ⑥ CaCl2 0.5g ⑦ H2O 100ml 例3．右表是某微生物培养基成分，请据此回答： （1）右表培养基可培养的微生物类型是 。 （2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。 如不想浪费此培养基，可再加入 . 自养型微生物 含碳有机物 （3）若除去成分②，加入（CH2O），该培养基可用于培养 。 （4）表中营养成分共有 类。 （5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是 。 （6）右表中各成分重量确定的原则是 。 （7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分 。 固氮微生物 3 调整pH 依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂） 第一部分 微生物的利用 实验1：大肠杆菌的培养和分离 2、特点：结构简单,形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物. 3、种类 病毒 原核生物：细菌、放线菌 真菌：酵母菌 原生动物 一、微生物及特点 1、微生物：一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称． 二、关于细菌 1、基本结构 2、分裂方式 3、生殖类型 4、变异类型 5、在基因工程中的应用 1、细菌的外形 大肠杆菌属于杆状菌 图1-1 常见的三种细菌典型形态 A.球菌 B.杆菌 C.弧菌 2、细菌的营养类型 根据细菌所利用的能源和碳源的不同将细菌分为两大营养类型。 自养型: 异养型: 光能自养型:光合细菌 化能自养型:硝化