流式的原理和应用301医院内部讲课.pdf

流式细胞分析技术的原理及应用 高艳红 解放军总医院生化科 2015年2月 主要内容  第一部分 流式细胞仪的原理和应用  第二部分 异体同型输血的流式检测  第三部分 开展的研究工作 第一部分 流式细胞仪的原理和应用 FC500型流式细胞仪 EPICS XL 流式细胞仪 基本概念 1. 流式细胞仪(Flow Cytometer):是集光电子物理，光电测量，计 算机，细胞荧光化学，单抗技术为一体的高科技细胞分析仪。 2. 流式细胞术(Flow Cytometry):利用流式细胞仪对处于快速流 动的细胞或生物颗粒进行多参数、快速（每秒可达1000-10000 个）的定量分析和分选（纯度可达99% 以上）的技术。 EPICS XL 流式细胞仪 电源箱 自动进样器 流式细胞仪主机 流式细胞仪工作站 流式细胞仪的基本功能 1.细胞表型分析(包括膜内及核膜成份分析) cellular phenotype 2.DNA/RNA含量及细胞周期分析 DNA content analysis 3. 某些自身抗体的检测 内 容  流式细胞仪的基本原理  流式细胞仪的应用  流式细胞仪的操作 基本原理  流 路  光 路  电 路  气 路 流式细胞仪结构  流动室及液流驱动系统:鞘液  激光光源及光束形成系统 :透镜、滤光片、小孔， 聚焦光源  光电管和检测系统：收集不同波长的荧光信号， 光电倍增管（PMT）、补偿电路，荧光信号转换 为电信号，并将信号放大  计算机和分析系统 流式细胞仪的主要技术指标 1. 流式细胞仪的分析速度： 一般流式细胞仪每秒检测1000～ 5000个细胞,大型机可达每秒上万个细胞。 2. 流式细胞仪的荧光检测灵敏度：一般能测出单个细胞上600个荧光分子,两个 细胞间的荧光差＞5%即可区分。 3. 前向角散射（FSC）光检测灵敏度：前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小, 一般流式细胞仪能够测量到0.2μ m～０.5μ m。 4. 流式细胞仪的分辨率：通常用变异系数CV值来表示，,一般流式细胞仪能够达 到2.0%,这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时要求必须达到的。 5. 流式细胞仪的分选速度：一般流式细胞仪分选速度＞1000个/秒，分选细胞纯 度可达99%以上。 流 路 6  单细胞悬液，浓度为10 /ml  大多数仪器是在50-300 µm 大小的孔径中,将 细胞悬液注射进入鞘液中  这一过程,称为流体动力学聚焦 流 动 室（flow cell ） Injector Tip Sheath fluid Fluorescence signals Focused laser beam 光 路 光