第一章1紫外可见分光光度法.pptVIP

光是一种电磁辐射,透过介质时将吸收一定波长的光,反射或透过另一部分波长的光. 光谱分析法就是以测定物质发射或吸收的电磁辐射的波长和强度为基础建立起来的分析方法. 紫外可见分光光度法 一、概述 紫外、可见分光光度法又称紫外、可见吸收光谱法，是基于分子内电子跃迁产生的吸收光谱进行分析测定的一种仪器分析方法，波长范围200～800nm。 运动状态：电子运动、组成分子的各原子间振动、分子的整体转动 对应能级：电子能级、振动能级、转动能级 相应光谱: 电子光谱、振动光谱、转动光谱 特点 灵敏度高：痕量分析（0.001％～0.0001%）、微量分析（0.001％～1％）、常量分析（1％～50％） 准确度高：相对误差2％～5％ 仪器简单、价格便宜、操作方便 应用广泛：含有生色团和共轭体系的有机化合物的鉴定，几乎所有金属元素的测定，也能用于非金属元素分析。 二、方法原理 1. 有机化合物的紫外、可见吸收光谱 有机化合物的紫外、可见吸收光谱取决于有机化合物分子的结构。从化合物的性质来看, 与紫外、可见吸收光谱有关的电子跃迁： n-σ*跃迁：含杂原子N、O、P、S和卤素原子的饱和有机化合物发生此跃迁； π-π*跃迁和n-π*跃迁：要求有机化合物分子中含不饱和基团，如：C＝C,C＝O, C≡N 生色团：分子中能吸收紫外或可见光的结构单元. 均含π键基团。 助色团：能使生色团吸收峰向长波长位移并增强吸收强度. 并无生色作用，但能增加生色团的生色能力，含有n未成键电子，如-OH，-SH，-X， -NH2 π-π*跃迁：产生强吸收带，摩尔吸收系数达ε达104L/（mol ·cm） n-π*跃迁：吸收光谱强度小，ε一般在500L/（mol ·cm）以下 如有机化合物含几个生色团,生色团之间由单键分开,不产生共轭效应,则该化合物的吸收光谱基本上由这些生色团的吸收带组成; 如有机化合物含多个相同的生色团,其吸收峰的波长基本不变,而摩尔吸收系数将随生色团数目而增加; 如有机化合物分子中生色团发生共轭作用,则原有吸收峰将发生位移,同时摩尔吸收系数增大. 溶剂效应：溶剂极性的波动引起某些化合物吸收光谱的红移或蓝移。极性较大的溶剂，一般使π-π*跃迁谱带向长波方向移动，称为红移；极性较小的溶剂，一般使n-π*跃迁谱带向短波方向移动，称为蓝移。 红移效应：吸收峰的λmax向长波方向移动的现象。如某些有机化合物经取代反应引入含有未共享电子对的基团之后 (例: 有机苯) 蓝移效应：吸收峰的λmax向短波方向移动的现象。如在生色团一端引入一些取代基后。 2. 朗伯-比尔定律Lambert-Beer 在一定条件下，物质的吸光度与溶液浓度和溶液厚度的乘积成正比。光度法定量分析依据： A=εbc A=lg1/T=lgI0 /I 成立条件： 样品溶液因素：仅在稀溶液成立 仪器因素：只适用于单色光 1. 辐射光源 能发射足够强度的连续光谱，稳定性好，辐射能力随波长无明显变化，使用寿命长。 钨灯：可见光区的连续光源，在可见的能量只占钨灯总辐射能的11％左右，波长范围300～2500nm 氘灯：近紫外区光源，在160～375nm处产生连续光谱，其辐射强度比氢灯约大4倍 2. 分光器 从连续光谱中分离出所需要的足够窄波段的光束，核心部件，其性能直接影响光谱带通的宽度，从而影响测定的灵敏度、选择性和工作曲线的线性范围。 分光器由入射狭缝、反射镜、色散元件、出射狭缝组成 常用色散元件有棱镜和光栅。光栅在整个波长区可提供良好的、均匀一致的分辨能力，而且成本低，便于保存。 3. 吸收池 根据材料分为玻璃和石英吸收池，前者用于可见区，后者用于紫外和可见光区，光学区必须平整光洁，尺寸和构造根据使用要求选用。 4. 检测器 检测光信号，并将光信号转变为电信号。要求灵敏度高，响应时间短，线性关系好，对不同波长的辐射具有相同的响应，噪声低，稳定性好等。现在广泛使用的检测器是光电倍增管。 5. 记录器和信号显示系统 电信号再经适当放大后，用记录器进行记录，或用数字显示。微机处理机(信号记录和处理、对分光光度计进行操作控制) 常有的可见分光光度计有721型分光光度计和722型分光光度计等.紫外分光光度计为751型分光光度计和753型分光光度计等. 四、实验技术 1. 样品的制备 紫外、可见吸收光谱测定通常在溶液中进行. 对光谱分析溶剂的要求: 良好的溶解能力,在测定波段没有明显的吸收,被测组分在溶剂中具良好的吸收峰形,挥发性小,不易燃,无毒性,价格便宜