实验 细胞内液泡系与线粒体的活体染色.pptVIP

细胞内液泡系和线粒体的活体染色 一、实验目的 了解活体染色的定义及原理； 熟悉液泡系和线粒体活体染色的方法和步骤。 二、定义及原理 所谓活体染色，是指利用某些无毒或毒性较小的染色剂显示出细胞内某些天然构造存在的真实性，而不影响细胞的生命活动，不产生任何物理化学变化以致引起细胞的死亡的染色方法。即在染色和观察过程中，细胞或组织始终保持其生命状态。 活染法弥补了活体观察法不能显示细胞精细结构的不足，也避免了固定染色法对细胞结构的破环和造成人为假象的弊病。遗憾的是，适宜活体染色的染料较少，能显示出的结构和种类也不多。 活体染色分为体内活染和体外活染两种。前者是将染料注射于生物体内，染色后再取材观察。后者是取材后，对离体的活细胞进行染色。为保持离体细胞的正常存活，染色时需供给细胞以正常的温度，渗透压，PH等。 实验报告 绘制中性红活染的液泡系图和健那绿-B活染的线粒体图，做好图例和标注。 * 实验结果描述详细、客观、有比较、有数据。实验讨论深入、客观、有科学涵义和professional。 在中性或微碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡中排泌。由于液泡为酸性，因此进入液泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色。原生质和细胞壁一般不着色。 死细胞由于原生质变性凝固，细胞液不能维持在液泡内，用中性红染色不产生液泡着色现象；相反，中性红的阳离子却与带有一定负电荷的原生质及细胞核结合，而使原生质与细胞核带微红色 。 1. 原理：中性红是一种弱碱性 pH 指示剂，变色范围 pH6.4～8.0之间（由红变黄）。其胶粒表面带阳离子，被染部分具阴离子，它们彼此之间就发生了电吸附作用（静电吸附）。 在动物细胞内，凡是由膜所包围的小泡和液泡除线粒体外都属于液泡系，包括高尔基器、溶酶体、微体、消化泡、自噬小体、残体、胞饮液泡和吞噬泡，都是由一层单位膜包围而成。这些细胞器几乎每个细胞都有。 软骨细胞内含有较多的粗面内质网和发达的高尔基复合体，能合成与分泌软骨粘蛋白及胶原纤维等，因而液泡系发达。 中性红是液泡系特殊的活体染色剂，只将液泡系染成红色，在细胞处于生活状态时，细胞质及核不被染色，中性红染色可能与液泡中的蛋白有关。 2. 健那绿(Janus green B)染液，原来也曾译为詹纳斯绿B，是专一性染线粒体的活细胞染料，线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。因此可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色，而细胞质接近无色。线粒体能在健那绿染液中维持活性数小时，通过染色，可以在高倍显微镜下观察到生活状态的线粒体的形态和分布。 三、操作程序 用解剖针破坏蛙的脊髓，然后把腹部皮肤剪开，使露出胸骨的剑突部分，剪取一小块剑突软骨边缘最薄的部分，放入载片中央的中性红染液中，染色10—30分钟，盖上盖玻片。用高倍镜观察，可见软骨细胞为椭圆形、细胞核清楚易见，在细胞核的上方有许多被染成玫瑰红色的大小膜泡，此区即液泡系。 取蛙肝脏边缘米粒大小的一块组织，放入10--20ml生理盐水中洗涤去除血液，用吸水纸吸去多余水分，将肝组织置于滴有健那绿-B的载玻片上，用镊子撕拉肝组织，然后将整块的肝组织移出，染色10min左右，加盖玻片观察破碎的肝细胞。可见玻片上有形状规则的椭圆形血细胞，形状不规则的近于方圆形的肝细胞、细胞核及核仁及远远小于细胞的做不规则运动的线粒体。 用镊子撕取玉树叶叶片下表皮，健那绿-B染色10分钟，可在细胞质中看到随细胞质环流而运动的被染成兰色的线粒体; 撕取莴笋叶下表皮，置于中性红中染色10分钟，可见许多大小不同的液泡。 * 实验结果描述详细、客观、有比较、有数据。实验讨论深入、客观、有科学涵义和professional。 * *