实验七：血清铁及总铁结合 一 副本.pptVIP

血清铁及总铁结合力测定 【目的与要求】 掌握血清铁及总铁结合力测定的原理和方法及注意事项； 了解血清铁及总铁结合力各种测定方法的优缺点。 【原理】 总铁结合力 (TIBC) :是指血清中的运铁蛋白全部被铁饱和所能结合的铁量。 总铁结合力测定方法:将过量铁标准液加到血清中，使之与未带铁的运铁蛋白结合，多余的铁被轻质碳酸镁粉吸附除去，然后测定血清中总铁含量，即为总铁结合力。 １.血清铁测定的试剂组成与配制 2. 血清铁测定操作步骤 3.总铁结合率测定的试剂组成与配制 1、100mg/L（1791μmol/L）铁标准贮备液 6ml ， 4℃保存。 10mg/L(179.1μmol/L)的铁标准应用液的配制：取贮备液10倍稀释，即取5ml铁贮备液加蒸馏水稀释至50ml。 1mg/L(17.91μmol/L)的铁标准应用液的配制：取10mg/L铁标准应用液10倍稀释，即取1ml 10mg/L(179.1μmol/L)铁标准应用液加蒸馏水稀释至10ml。 2、铁吸附剂50mg/支，4℃保存。 3、铁显色剂：3号甲粉剂一支，3号乙粉剂一支，3号丙液100ml×1瓶，4℃保存。 用时将甲、乙二粉剂倒入丙液中，充分混匀、溶解，即为铁显色剂，4℃~8℃避光保存。 4.总铁结合率测定操作步骤 　（1）样本前处理：取血清（浆）1ml加入179.1μmol/L铁标准液1ml混匀，放置10分钟后，加入铁吸附剂50mg，混匀，室温放置5分钟，再混匀一次，共混匀四次，3000～3500转/分，离心10分钟（台式离心机），取上清1ml，按操作表操作。 结果计算 注意事项 1．实验用水必须经过去离子处理。玻璃器材必须用　　10％(V／V)盐酸浸泡24h，取出后再用去离子水冲洗后方可应用。应避免与铁器接触，以防止污染。 2．溶血标本对测定有影响，因此血清应避免溶血。 3．血清铁还存在着日内生理性变异，早上的值最高，晚上的值最低。 5．所用试剂要求纯度高，含铁量极微。 方法学评价 1．目前测定血清铁的方法主要有：分光光度法，原子吸收分光光度法，溶出伏安法等。 2．分光光度法根据显色剂的不同又分为很多种方法，主要有铬天青、亚铁嗪、菲罗啉和双吡啶等方法。 【思考题】 1．阐述血清铁测定的原理及注意事项。 2．在血清铁测定中，对实验用水和器材有何要求?为什么? * * 【原理】 血清铁:血清中的铁与运铁蛋白结合成复合物，在酸性介质中铁从复合物中解离出来，再被还原剂还原成二价铁，并与双吡啶结合成粉红色的络合物，在一定范围内，铁离子的多少与色泽成正比。 络合物在520nm处有吸收峰，与同样处理的铁标准液比较，即可求得血清铁含量。 1、100mg/L（1791μmol/L）铁标准贮备液：1ml溶液一瓶，4℃保存。 2mg/L（35.8μmol/L）铁标准应用液的配制：取铁标准贮备液0.2ml加蒸馏水定溶至10ml，4℃保存。 2、铁显色剂：2号甲粉剂一支，2号乙粉剂一支，2号丙液100ml×1瓶。用时将甲、乙二粉剂倒入丙液中，充分混匀，溶解，即为铁显色剂，4℃～8℃避光保存。 0.5 35.8μmol/L铁标准应用液（ml） 1.5 1.5 1.5 铁显色剂（ml） 0.5 血清（ml） 0.5 蒸馏水（ml） 测定管 标准管 空白管 加入物名称(ml ) 混匀后，沸水浴5分钟（空白及标准管可以不煮），冷却后离心，3500转/分，离心10分钟，取上清液1.0ml，0.5cm光径，波长520nm，双蒸水调零，测各管吸光度OD值。 1 17.91μmol/L铁标准应用液（ml） 2 2 2 铁显色剂（ml） 1 上清液（ml） 1 蒸馏水（ml） 测定管 标准管 空白管 加入物名称(ml ) 混匀后，沸水浴5分钟（空白及标准管可以不煮），冷却后离心，3500转/分，离心10分钟，取上清液1.5ml，0.5cm光径，波长520nm，双蒸水调零，测各管吸光度OD值。 （2）操作表