淤胆血清及肝细胞生长因子体外诱导BMSCs 向肝细胞分化.pdfVIP

344 Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery, March 2010, Vol. 24, No.3 · · • 干细胞与组织工程 • 淤胆血清及肝细胞生长因子体外诱导 BMSCs 向肝细胞分化 1 2 1 3 1 钟晓琳 万居易 王忠琼 胡莲 李昌平 【摘  要】 目的 探讨大鼠血清体外扩增BMSCs 的可能性，及淤胆大鼠血清和肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor ，HGF ）体外诱导其分化为肝细胞，解决肝组织工程细胞来源短缺的可行性。  方法 取6 周龄健康雌性 Wistar 大鼠股骨和胫骨骨髓细胞，分离、纯化并传代培养BMSCs 。取12 ～14 周龄健康Wistar 大鼠40 只，随机分为两组 （n=20 ），制备正常及淤胆大鼠血清。取第3 代BMSCs 按培养液不同分组：A 组，DMEM 加10%FBS；B 组，肝细胞生长培 养基（hepatocyte growth medium ，HGM ）加5%FBS；C 组，HGM 加5% 正常大鼠血清；D 组，HGM 加5% 淤胆大鼠血清； E 组，HGM 加5% 淤胆大鼠血清、25 μg/L HGF 。观察各组诱导培养过程中的细胞形态变化，MTT 法测定细胞生长曲线， 免疫细胞化学法检测甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP ）、细胞角蛋白18 （cytokeratin 18，CK18 ）表达，高碘酸- 希夫染色 检测糖原表达，脲酶- 谷氨酰脱氢酶法检测上清液尿素含量。  结果 诱导培养过程中D 、E 组出现多角形及双核细胞，A 、 B 、C 组细胞形态无明显变化。MTT 生长曲线显示C 组细胞生长速度最快，B 组最慢，与A 、D 、E 组比较差异均有统计学 意义（P 0.05 ），A 、D 、E 组间比较差异无统计学意义（P 0.05 ）。D 、E 组于诱导培养7 d 开始出现AFP 及CK18 阳性表 达，14 d 开始出现糖原阳性表达，同时间点E 组阳性表达率高于D 组（P 0.05 ）；D 、E 组上清液中尿素含量随诱导时间延 长逐渐升高，同时间点E 组高于D 组（P 0.05 ）。各时间点A 、B 、C 组均未见AFP 、CK18、糖原阳性表达，尿素浓度无明 显变化。  结论 正常大鼠血清能明显促进BMSCs 增殖；淤胆大鼠血清对BMSCs 有一定促增殖作用，且能有效诱导其 向肝细胞分化；联合使用淤胆血清和HGF 能提高细胞分化率。 【关键词】 淤胆血清 肝细胞生长因子 BMSCs 肝细胞 体外诱导 大鼠 中图分类号： Q813.11 R318.14 文献标志码：A CHOLESTATIC SERUM AND HEPATOCYTE GROWTH FACTOR INDUCE DIFFERENTIATION OF BONE 1 2 MARROW MESENCHYMAL STEM CELLS INTO HEPATOCYTES IN VITRO/ZHONG Xiaolin , WAN Juyi , WANG 1 3 1 1 2 Zhongqiong , HU Lian , LI Changping . Department of Digestion, Department of Cardiac Surgery, the Affiliate