探究现代微生物学实验技术课程论文.doc

　　探究现代微生物学实验技术课程论文 探究现代微生物学实验技术课程论文 导读：现代微生物学实验技术课程论文现代微生物学实验技术课程论文 实验一、耐高盐菌的分离与纯化 1、实验目的 1、认识并了解土壤微生物物种的多样性； 2、分离纯化土壤环境中耐盐的菌株。 2、实验方法 2.1 实验器材与试剂 恒温振荡培养箱；显微镜；超净台；灭菌锅；锥形瓶；培养皿；结晶紫染色液；液体培养基：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L；固体培养基：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，琼脂条20g/L； 2.2 实验步骤 2.2.1土壤的制备：选择高盐的土壤区域，去表层土，挖5-20cm深度的土壤数10g，装入已灭菌的牛皮纸袋。 2.2.2培养基的配制与灭菌：液体培养基200ml，分装为4瓶，每瓶50ml，固体培养基100ml。灭菌： 121°C，20min，高压蒸汽灭菌。灭完菌后取出，两瓶50ml的液体培养基中各加入15%的NaCl，另外两瓶50ml的液体培养基中各加入5%的NaCl，混匀。同时将固体培养基取出倒平板。 2.2.3耐盐微生物的富集：分别在NaCl浓度为5%，15%的50mL 液体培养基中加入相同量5g的土壤，28℃、150r/min摇床培养。培养富集4天后，从富集一代的培养液中吸取5%的菌液到新的NaCl浓度为5%，15%的液体培养基中继续富集培养3天。 2.2.4耐盐微生物的分离纯化：取NaCl浓度为5%，15%富集培养的培养物镜检（结晶紫染色），发现NaCl为5%的浓度下的菌更密集，挑取该浓度的菌液，进行划线分离，得到纯培养物后再挑取两种不同的菌落再次划线分离，从而得到单菌落。 3、实验结果 通过对高盐土壤中微生物的富集及分离纯化，得到如下图两株菌株，命名为L-1、L-2。菌株L-1产 色素，菌落呈 ，圆形，表面光滑，边缘整齐，菌 株L-2产橘红色色素，菌落呈橘红色，圆形，表面光滑，边缘不整齐。 实验二 、耐盐菌的形态学及生理生化反应 1、实验目的 1、从形态学特点对耐盐菌株进行初步鉴定； 2、对耐盐菌株进行生理生化实验，进一步鉴定菌株。 2、实验原理 形态学鉴定是菌种鉴定中最简单、最初步也是最直观的鉴定方法。包括可以通过肉眼观察菌落特征、显微镜观察菌株细胞结构以及革兰氏染色等方法，都是形态学鉴定中比较常用的方法。 微生物细胞在酶的催化下进行各种各样的生理生化反应。把微生物细胞在一定条件下培养，通过观察生理现象和检查代谢产物，可以了解微生物的代谢过程和特点。由于不同微生物可能具有不同的酶，代谢途径和代谢产物可能也有所不同，生理生化反应是微生物鉴定分类鉴定的重要指标之一。 糖发酵实验：微生物具有不同的利用各种碳源的能力，其原理在于不同微生物具有不同的酶系。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大差异。有些细菌能分解某种糖产生有机酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢气、甲烷、二氧化碳等），有些细菌只产酸不产气。 石蕊牛乳 3 4 5 6 7 探究现代微生物学实验技术课程论文 导读：现代微生物学实验技术课程论文试验：石蕊是在中性时呈粉红色；碱性是呈蓝色；还原时，则自下 而上使牛奶褪色还原成白色。乳酸细菌发酵乳糖产酸，石蕊变红，当酸度很高时，可使牛奶凝固。如试验菌产生蛋白酶，使酪蛋白分解，则使牛奶变得较澄清略透明，表明牛奶已胨化。 3、实验方法 3.1 实验器材与试剂 恒温培养箱；显微镜；超净台；灭菌锅；试管；0.6%Agar半固体培养基；革兰氏染色试剂；LB液体培养基：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g，NaCl 10g/L；糖发酵试验小管；石蕊牛乳实验试管培养基；菌株L-1、L-2、E.C、B.S 3.2 实验步骤 3.2.1对数期菌液的制备：分别挑取菌株L-1、L-2的单菌落接种于3ml的LB液体培养基中，37°C恒温振荡培养箱中培养16h。 3.2.2革兰氏染色：将菌株L-1、L-2分别涂片---固定---2%结晶紫1min，水洗擦干--碘液 1min，水洗擦干---95%乙醇洗脱25s---水洗擦干---复红染色1min---水洗擦干---镜检(分别用E.C和B.S做对照) 3.2.3游动性检测：将L-1、L-2分别用接种针穿刺接种至0.6%Agar半固体培养基(B.S做对照)，37°C恒温振荡培养箱中培养16h。 3.2.4生理生化反应： ①糖发酵试验（产酸产气）：用接种环分别挑取第二次划线分离的菌落L-1、L-2，接种于糖发酵装置小管中，并分别接种E.C和B.S做为对照实验，接种后装置小管倒置，37℃恒温培养箱，培养2d后观察结果。 ②石蕊牛乳实验（利用蛋白质酪素的能力）：分别在石蕊牛乳培养基中接种耐盐菌株L-1、L-2、E.C和B.S，放置于37℃恒温培养箱，两周时间左右观察结果。