2015版《中国药典》微生物限度检查法计数法修订解析.pptVIP

2015年版《中国药典》微生物限度检查法计数法修订解析 一、修订背景 1、国际化 （1）美国、欧盟、日本制药产品占世界市场份额的70-80%；ICHQ4B(药品管理部门对药典的互认)附录4A、4B和4C已经得出结论，美国药典、欧盟药典、日本药典中的微生物限度检验方法协调统一。 （2）中国虽然不是ICH的成员国，但中国与国外制药行业交往日益增多，且中国药品要想进入国际市场，药品检验方法和标准的统一势在必行。 一、修订背景 2、方法科学性和灵活性 （1）准确度：方法适用性试验模拟样品污染微生物后进行方法试验性验证。 （2）精密度：结果判定以变化范围进行规定，符合微生物计数规律。 （3）培养体系：采用更适宜的培养体系。 （4）偏差调查：微生物检验结果偏差调查的引入。 （5）与微生物指导原则、理念有机统一。 一、修订背景 3、兼顾国情： （1）适用性试验增加供试品对照组 （2）菌种采用CMCC （3）检验量、样品制备依照《中国药典》2010年版，与ICH不同。主要工艺、剂型限制，例如贴剂检验量规定完全不同。 一、修订背景 4、依据以上原则修订后具有以下特点： （1）修订后的计数法明确了《中国药典》2010年版未规定的事项。如：该检查方法的适用范围，替代法的应用原则。 （2）修订后的计数法合理性、有效性、准确性得以充分体现，结果更接近真实污染状况。如：方法适用性加菌方式发生变化。 （3）修订后的计数法与美国、欧洲、日本药典协调后方法一致，对于采用国际、国内两套体系（检验方法和检验标准）的生产企业而言，在方法一致的前提下，检测结果具有可比性，减轻企业检验负担。 二、格式变化 一个部分 微生物限度检查法 三个部分 1、非无菌产品微生物检查：微生物计数法 2、非无菌产品微生物检查：控制菌检查法 3、药品微生物限度标准：标准部分合并一部和二部内容 三、通用要求 1、检测环境 （1）环境洁净度应在受控洁净环境下的局部洁净度不低于B级单向流空气区域内进行。 （2）现状：2010年版GMP环境分级以A、B、C、D定义，对于微生物检测环境无具体描述，与国家标准分级不一致；相应的监测方法有区别。制药企业难以制定对应的标准和检测方法。 （3）国际协调案要求：在适宜的洁净度的环境中进行。 （4）发展趋势：既要最大可能防止微生物污染，又要防止检验过程对环境和人员造成的危害。活动区域的合理规划及区分将提高微生物实验室操作的可靠性。 三、通用要求 1、检测环境 （5）USP1117实验室分区原则： 1）实验区域划分合理：无菌、非无菌样品操作区域应与活菌培养区完全隔离，或采取其他无菌操作及防护措施减少污染事件发生概率。所有在实验室操作的关键检测过程在控制条件下执行。 2）无菌检查的较适宜环境：隔离器的使用。 三、通用要求 2、供试品前处理 三、通用要求 3、微生物计数法适用范围 三、通用要求 4、微生物计数定义变化 三、通用要求 5、计数方法 （1）平皿法：包括倾注法和涂布法。该项下明确可使用直径较大平皿，且培养基的用量应相应增加。 （2）薄膜过滤法 （3）最大可能数（Most-Probable-Number Method,简称MPN）。MPN法用于微生物计数时精确度较差，仅在供试品需氧菌总数没有适宜计数方法时使用，不适用于霉菌计数。 （4）方法选择原则：根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择。 三、通用要求 6、菌种 （1）原则 不同来源菌种在实际使用时应依据《中国药典》2010年版附录Ⅹ Ⅷ G药品微生物实验室规范指导原则的要求，药品微生物检验用试验菌应来自认可的国内或国外菌种保藏机构的标准菌株，或使用与标准菌株所有相关特性等效的商业派生菌株。 三、通用要求 （2）菌种编号 CMCC——中国医学菌种保藏中心 CMCC(F) 或 CMCC(B) B——代表细菌 F——代表真菌 ATCC——美国标准菌种收藏中心 著名的微生物保藏中心，创立于1899年，设在美国马里兰州罗克维尔市。收藏有细菌、真菌、动植物病毒、噬菌体、藻类和原生生物等16000株以上的微生物种株。 三、通用要求 （3）传代： 试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代）。 代的定义：每接种一次即为一代（有在新鲜的培养基上生长过程） 三、通用要求 （4）菌种的保藏 1）冷冻：在低温下保藏，需要加入保护剂，例如甘油，可以减少冷冻对菌种的伤害，一般在低于-30℃或-70 ℃冰箱内保藏，是一种有效的长期储藏方法。 2）冻干法保藏：是一种长期保藏菌种的方法，一般情况下购买的冻干菌种即为此种方法。使用时需要进行溶解、复壮、冷藏。 3）