MiR34b在儿童急性白血病中的表达、甲基化调控及临床意义的研究（可编辑）.docVIP

MiR34b在儿童急性白血病中的表达、甲基化调控及临床意义的研究 + 进行 miRNA 表达定量分析。 统计分析 白血病细 胞株、 初诊 AL 、ALL 、AML 及 MLL 各组患 儿 miR-34b 表达是否有差异, 并根据临床资料进行进一步分析, 以探讨 miR-34b 在儿童初诊 AL 、ALL 及 AML 的意义 。 同时 提 取细胞株或 其骨髓标本 DNA , 进行 重 亚硫酸氢钠修饰基因组 DNA ,运用甲基化特异 性 PCR (MSP )检测 miR-34b 启动子 区 CpG 岛甲基化状态,并通过甲基转移酶抑制 剂(5-aza-2-dC )处理 HL-60 及 K562 进一步检测其甲基化状态, 结合 临床资料 进一步 统计分析儿童 初诊 AL 、 ALL 及 AML 与其甲基化状态是否相关。 采用脂质体转染 hsa-miR-34b mimics 到 K562 细胞, 通过 流式 细胞仪检测转染效率,CCK-8 法检测细胞 增殖情况。 结果 : + 1、miR-34b 在正 常对 照、 白血 病细胞 株、 儿童 初 诊AL 、ALL 、AML 及MLL 各 组 的相对表达量 ?x±s 分别为5.22±1.15 、 0.03± 0.03 、 1.18±0.47 、 1.65±0.69 、 0.18±0.06 、?x 0.64±0.34 , 与正常对照组相比, 儿童初诊ALL组(P0.05)、 白血病细胞株组、 初诊 + AL 组 、AML 组及MLL 组(P 均0.01 )均有统计学 差异。 I 中文 摘要 MiR-34b 在儿 童急 性白 血病 中的 表达 、甲 基化 调控 及临 床意 义 的研 究 2、结合临床资料( 如性别、年龄、 免疫分型 、染色体、融合基因 、泼尼松实验 等 )做了进一步分 析,发现miR-34b 的相 对表 达量与儿童初诊ALL 患儿泼尼松 实验敏 感与否相关(P0.05 )。 3 、miR-34b 启动子在8 种 白 血 病 细 胞 株 中 均 出 现 甲 基 化 现 象 , 甲 基 化 阳 性 率 为 100% , 本实验共检测50 例儿童初诊AL 患儿, 其中31例初诊ALL 患儿 ,19例初诊AML 患 儿 ,其 甲基 化阳 性率 分别 为64% (32/50)、77.42% (24/31)和42.11% (8/19 ), 同时检测23例正常对照患儿,无一例出现甲基化现象。 4、5-aza-2-dC处理 白血 病细胞 株HL-60 及K562 后,miR-34b 的相 对 表达 量均 明显 升高,分别为49.5 倍和18.8 倍,其甲基化条带 均明显减弱。 5、结合临床资料( 如性别、年龄、 免疫分型 、染色体、融合基因 、泼尼松实验 等) 做了进一步分析, 发现miR-34b 的甲基化状 态与儿童初诊AL 患儿的免疫分型相关, 淋系与髓系的miR-34b 的甲基化状态之间具有 统计学差异(P0.05 )。 6、脂 质体转 染hsa-miR-34b mimics 到K562 细 胞后, 流式细 胞仪 检测 转染效 率为 61% ,CCK-8 法检 测各 组细 胞增殖 情况 ,发 现 转染hsa-miR-34b mimics 组48h 、72h 、 96h 及120h 均出现细胞增殖抑制作用 (P 均0.01 ) , 其中72h 抑制作用最明显, 抑制率 达45.7% 。 结论 : + 1、miR-34b 在白血病细胞株、 儿童初诊AL 、ALL 、AML 及MLL 各组患儿中表达 均明显减低, 提示miR-34b 可能作为 新的抑癌基 因参与儿童 初诊AL 、ALL 及AML 的形 成 , 同 时 在MLL基因重排阳性 儿 童 初 诊AL的发病 中 可 能 起 着 重 要 作 用 , 并 影 响 其 预后 。 2、miR-34b 的相对表达量与儿童初诊ALL 患儿 泼尼松实验敏感与否相关, 提示其 是否可以作为判定儿童初诊ALL 危险度及预后 的指标。 3、miR-34b 启动子 在 白血病细胞株、 儿童初 诊AL 、ALL 及AML 中均出现高度甲 基化现象, 提示miR-34b 在白血病细胞株、 儿童 初诊AL 、ALL 及AML 中均受甲基化机 制调控,可能作为新的抑癌基因发挥作用。 4、5-aza-2-dC处理 白血 病细胞 株HL-60 及K562 后,miR-34b 的相 对表达 量明 显升 高, 甲基化条带明显减弱, 进一步证实miR-34b 在白血病细胞株中受甲基化机制调控。 5、miR-34b 的甲基化状态与儿童初诊AL 患儿的 免疫分型相关, 提示miR-34b 启动 子 在