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第四讲 免疫血清学技巧
免疫血清学技术 ;一、凝聚性试验;(一)凝集试验;参与凝集试验的抗体主要为IgG、IgM。
凝集试验可用于检测抗原或抗体。
凝集试验可根据抗原的性质、反应的方式分为直接凝集试验(简称凝集试验)及间接凝集试验。 ;直接凝集试验 ;间接凝集试验;可溶性抗原;常用的载体颗粒;间接血凝试验;乳胶凝集试验;协同凝集试验;(二)沉淀试验 ;抗原可以是多糖、蛋白质、类脂等,抗原分子较小,单位体积内所含的量多,与抗体结合的总面积大,故在作定量试验时,为了不使过剩,通常稀释抗原,并以抗原稀释度作为沉淀试验效价。
参加沉淀试验的抗原称沉淀原,抗体称为沉淀素。 ;环状沉淀试验;琼脂免疫扩散试验;免疫电泳技术;二、标记抗体技术 ;高敏感性的标记分子 ;(一)荧光抗体标记技术 ;荧光色素;染色原理及方法 ;(二)酶标抗体技术;用于标记的酶;酶联免疫吸附试验(ELISA);固相载体 :聚苯???烯微量滴定板(珠),硝纤膜
包被:牢固的吸附在载体表面,保持免疫原性
可溶性物质或蛋白质抗原易包被
较大的病毒、细菌需打碎或提取抗原
用于包被的抗原或抗体需要纯化
包被的蛋白质浓度通常为1~10ug/ml
0.1mol/L pH9.6碳酸盐缓冲液包被
4℃过夜或37℃2~3h,4 ℃或-20 ℃保存;;试验方法主要有以下几种 ;;免疫组化染色技术;(三)放射免疫测定(RIA);三、中及试验 ;中及试验分为2种;;四、其他检测技术 ;免疫血清学技术的应用
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