第三章培养基及其配制-课件（PPT-精）.ppt

（二）培养基配制（以1L百合继代培养基为例） 1、培养基配方： MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂 2、配方成分计算： 大量元素（扩大10倍配1L） 微量元素（扩大100倍配1000ml） 有机物（扩大50倍配500ml） 铁盐（扩大100倍配1000ml） 6-BA(0.5mg/ml) NAA(0.1mg/ml) 蔗糖 琼脂 100ml 10ml 10ml 10ml 3ml 2ml 30g 8g 3、配制步骤 混合 溶化琼脂（600-700ml）? 母液的量取 加蔗糖 溶解 液 定容（1L） 调PH（5.8） 分装 1.量取前先检查母液并摇动 2.量母液前,移液管和量筒应润洗 第三章 培养基及其配制 培养基是植物组织培养的重要基质。在离体培养条件下，不同种植物的组织对营养有不同的要求，甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不相同，只有满足了它们各自的特殊要求，它们才能很好地生长。因此，没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官，在建立一项新的培养系统时，首先必须找到一合适的培养基，培养才有可能成功。 第一节　培养基成分及作用 主要成分包括：无机盐类（大量和微量元素）、维生素类、氨基酸类、有机附加物、植物生长调节物质、糖类，水和琼脂等。 1.大量元素：指浓度大于0.5mmol／L的元素等。 (1)N：是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等 的组成成分，在制备培养基时以NO3—N和NH4—N两种 形式供应。 (2)P：是磷脂的主要成分。常用的物质有KH2P04或NaH2P04 (3)K：对碳水化合物合成、转移、以及氮素代谢等有密切关系。 制备培养基时，常以KCI、KN03等盐类提供。 (4)Mg、S和Ca、Mg： 是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂；S是含S氨基酸和蛋白质的组成成分。它们常以MgSO4·7H20提供。Ca是构成细胞壁的一种成分，Ca对细胞分裂、保护质膜不受破坏有显著作用，常以CaCl2·2H2O提供。 2.微量元素：指小于0.5mmol／L的元素 主要有Fe，B，Mn，Cu，Mo，Co等。 铁是一些氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶等的组成成分。同时，它又是叶绿素形成的必要条件。培养基中的铁对胚的形成、芽的分化和幼苗转绿有促进作用。在制做培养基时不用Fe2SO4，和FeCl3(因其在pH值5．2以上，易形成Fe(OH)3的不溶性沉淀)，而用FeSO4·7H20和Na2—EDTA结合成合物使用。 B，Mn，Zn，Cu，Mo，Co等，也是植物组织培养中不可缺少的元素，缺少这些物质会导致生长、发育异常现象。 3.有机化合物 ⑴碳水化合物：最常用的碳源是蔗糖，葡萄糖和果糖也是较好的碳源，可支持许多组织很好的生长。蔗糖使用浓度在2%—3%，常用3%高压灭菌时，一部分糖会发生分解，制定配方时要给予考虑。在大规模生产时，可用食用的绵白糖代替。 ⑵维生素：这类化合物主要是以各种辅酶的形式参与多种代谢活动，对生长、分化等有很好的促进作用。主要有VBl(盐酸硫胺素)、VB6(盐酸吡哆醇)、Vpp(烟酸)、Vc（抗坏血酸）、有时还使用生物素、叶酸、VB12等。一般用量为0.1—1.0mg／L。 VB1对愈伤组织的产生和生活力有重要作用，VB6能促进根的生长，Vpp与植物代谢和胚的发育有一定关系。Vc有防止组织变褐的作用。 生长培养基是植物再生的必要条件 蔗糖 （0%） 蔗糖含量（ 1%） 蔗糖含量（ 5%） 外植体完全被绿色的芽所包裹，根生长在其下表面 在外植体上既没有芽发生，也没有根和愈伤组织产生 在外植体上表面边缘产生芽，也有一些根发生 芽从外植体的上表面发生而根从下表面发生 tissue culture in the African Violet (3)肌醇又叫环己六醇：在糖类的相互转化中起重要作用。使用浓度一般为l00mg／L，适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对细胞壁的形成也有作用。 ⑷氨基酸：是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。培养基中最常用的氨基酸是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。 4.有机附加物：其对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用，但对器官的分化作用不明显。其成分大多不清楚，所以一般应尽量避免使用。 常用的有机附加物有: ⑴椰乳： ⑵香蕉： ⑶水解酪蛋白： 5.植物生长调节物 植物激素是植物新陈代谢中产生的天然化合物，它能以极微小的量影响到植物的细胞分化、分裂、发育，影响到植物的形态建成、开花、结实、成熟、脱落、衰老和