模拟移动床色谱分离纯化花生四烯酸甲酯的工艺条件研究.pdfVIP

摘 要 花生四烯酸(ARA)是一种人体必需的功能性脂肪酸，高纯度 ARA 可作为营养强化剂、医疗保健品 以及制药原料参与调节人体生理机能。本课题研究目的是建立连续高效的分离纯化高纯度ARA 工艺， 得到纯度较高的 ARA 产品。试验以含有 ARA 的微生物油脂为原料，通过对微生物油脂进行预处理、 D72-Ag+树脂色谱柱分离纯化 ARA 甲酯以及模拟移动床色谱分离纯化ARA 甲酯，摸索出分离纯化 ARA 甲酯的较优工艺条件，从而得到高纯度ARA ，为ARA 的工业化生产提供可靠的技术支持。 1.应用气相色谱—质谱联用技术分析了微生物油脂经皂化水解、尿素包合、BF -CH OH 法甲酯化 3 3 后的微生物油甲酯脂肪酸的组成，共有 6 种脂肪酸被分离和鉴定出来。采用面积归一法对各脂肪酸的相 对百分含量进行计算。结果表明，初纯后的微生物油脂中含有棕榈酸、亚油酸、硬脂酸、花生四烯酸、 山嵛酸、二十四烷酸，其含量分别为6.87%、19.04%、7.96%、46.64% 、6%、9.02% 。 + 2.采用 D72-Ag 树脂色谱柱分离纯化经尿素包合初纯后的微生物油甲酯中的 ARA 甲酯，气相色谱 检测 ARA 甲酯含量。以 ARA 甲酯纯度和收率为指标，研究了分离纯化 ARA 甲酯的工艺条件。负载 Ag+ D72 树脂的最大饱和吸附量为 9 mg/g 干树脂，在吸附温度 0 ℃，PUFA 甲酯上样质量浓度5 mg/mL， 5%丙酮正己烷溶液（体积比）洗脱，解吸温度 30 ℃，洗脱流速2 mL/min 的条件下ARA 甲酯纯度达到 89.4%，收率达到 79.3% 。 3.采用模拟移动床色谱分离纯化经尿素包合初纯后的微生物油甲酯中的 ARA 甲酯，并以 ARA 甲酯 的纯度和收率为指标对其分离工艺进行优化。试验确定了最佳进样浓度为20 mg/mL 、切换时间 720 s， 同时还确定了进样流速、洗脱流速、解吸流速以及再生流速4 个因素的中心范围，通过四元二次回归正 交旋转组合试验对各中心范围值进行优化，优化出最佳的模拟移动床色谱分离纯化 ARA 甲酯的工艺参 数为：进样流速 39.3 mL/min、洗脱流速 8 mL/min、解吸流速4.5 mL/min 、再生流速 5.5 mL/min 。各区 最优分配及连接方式：吸附区 8 根色谱柱串联，洗脱区 4 根色谱柱串联，解吸区 5 根色谱柱串联，再生 区 3 根色谱柱串联。该条件下得到的 ARA 甲酯纯度为91%，收率为 92.9% 。 关键词：花生四烯酸；气相色谱；气相色谱—质谱联用；分离纯化；模拟移动床色谱 I Abstract Arachidonic acid (ARA) is an essential functional fatty acid, the high purity ARA as nutrition enhancer, health care products and pharmaceutical raw materials involved in the regulation of the bodys physiological function. The purpose of this research is to establish a continuous and efficient process for the separation and purification of ARA, to obtain high purity ARA products. The microbial oil was raw materials in the test. Through microbial oil pretreatment, D72