探讨灵芝免疫调节功能蛋白抑制终端酶活性进而限制肺癌-卫生福利部.PDFVIP

Yearbook of Chinese Medicine and Pharmacy, 25 (2), 67-104, 2007 中醫藥年報 第 25 期第 2冊 編號：CCMP93-RD-009 探討靈芝免疫調節功能蛋白抑制終端酶活 性進而限制肺癌細胞生長機制 柯俊良 中山醫學大學 摘 要 靈芝一直以來被視為傳統中藥的翹楚，在細胞和動物實驗證實靈芝具有保 護肝臟、抗腫瘤等功能。腫瘤的治療一直是生物醫學領域相當被重視的焦點， 尤其近年來許多學者著重於促進腫瘤細胞死亡來達到減緩腫瘤形成的目的。由 Hanahan 和 Weinberg 等人指出癌症形成的六大特徵其中擁有無限次複製能力 是癌化過程中必備的條件（ Hanahan and Weinberg, 2000 ），所以終端酶在癌化 過程中扮演著不可或缺的角色。最近有文獻指出在裸鼠模式中發現服用茶多酚 類化合物 epigallocatechin gallate （EGCG ）後會明顯抑制腫瘤生長及染色體終 端酶活性（Naasani et al, 2003 ），因此增加中草藥對於抗癌方面的科學證據。 綜合以上觀點本計畫著重於FIP-gts 抑制終端酶活性作用機制進而抑制癌細胞 的生長，達到抗癌的作用。我們初步實驗證實松杉靈芝蛋白（ FIP-gts ）會造成 A549 肺癌細胞皺縮並抑制細胞生長，然而對人類正常肺纖維母細胞 MRC-5 毫無影響。接著進一步分析是否有抗腫瘤的特性，首先以染色體終端酶重覆增 幅步驟 （Telomeric Repeat Amplification Protocol, TRAP assay ）分析有無處理 FIP-gts後肺癌細胞細胞株 A549 終端酶活性表現，結果發現隨著FIP-gts濃度 增加其活性減少呈現劑量關係，以半定量和定量 RT-PCR 分析結果發現hTERT mRNA隨著 FIP-gts 濃度增加而減少轉錄表現量，接著以 luceriferase 活性分 析，結果發現隨著FIP-gts濃度增加而減少 hTERT promoter活性。接著並將其 構築完成的hTERT- pGL3在經一系列的缺失短小突變決定其 FIP-gts所影響的 位置，結果發現在-196 to -177的區域為 E-box site ，主要是bHLHZ蛋白家族 所結合的區域，其中 c-Myc 為轉錄因子會直接影響htert轉錄活化。然而我們 發現重組 FIP-gts 並不會影響c-Myc蛋白的表現量但會降低磷酸化的表現。而 67 中醫藥年報 第 25 期第 2冊 我們利用EMSA證實 c-Myc蛋白明顯降低與 E-box 結合能力。本實驗研究結 果證實松杉靈芝菌絲體中純化的免疫調節功能蛋白具有抗癌的功效。此免疫調 節蛋白可應用於抑制肺癌細胞的終端酶活 性。所以將來有發展出治療或搭配其 他抗癌藥物一起處理抵抗腫瘤並減少腫瘤細胞的再復發。 關鍵詞：松杉靈芝、免疫調節蛋白、染色體終端酶 68 中醫藥年報 第 25 期第 2冊 Number: CCMP93-RD-009 Blocking Telomerase by Fungal Immunomodulatory Protein, FIP-gts , from Ganoderma Tsugae is a Major Mechanism for Limiting the Growth of Human Lung Cancer Cells Jiunn-Liang Ko Chung Shan Medical University ABSTRACT Telomerase