芦丁的提取(华西药学药化实验).pptVIP

槐花米中芦丁的提取分离与鉴定 目的要求： 1.掌握黄酮（苷）类化合物的预试及预试原理。 2.掌握黄酮（苷）类化合物的提取原理和方法。 3.掌握黄酮（苷）重结晶精制的原理和方法。 4..掌握黄酮苷类化合物酸水解操作原理和方法。 5.掌握纸层析、薄层层析定性分析的原理和方法。 6.掌握乙酰化反应制备乙酰化物的原理和方法。 7.了解熔点测定的意义。掌握熔点测定的原理和操作方法。 8.巩固抽滤、重结晶等基本操作。 9.掌握苷类成分的一般鉴定程序。 原理： 1. 碱提酸沉芦丁：芦丁属黄酮类化合物，分子中有较多酚羟基，具弱酸性，易溶于热碱中，酸化后又析出，因此可以用碱溶酸沉碱溶酸沉碱溶酸沉碱溶酸沉的方法提取芦丁，又利用芦丁在冷水和热水中溶解度相差较大的特性进行重结晶精制2.显色反应：黄酮类化合物的颜色反应多与分子中的酚羟基及γ-吡喃酮环有关。 A.Mg粉-HCl反应：此为鉴定黄酮类化合物最常用的颜色反应，多数黄酮类化合物显玫瑰红色。 B.AlCl3反应：黄酮类化合物或（）等结构可以和Al3+生成黄色络合物，且在紫外下可观察到荧光。 C.FeCl3反应：黄酮类化合物中因含有酚羟基，故可产生阳性反应。 D.Monish反应：苷在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱水产生糠醛及其衍生物，糠醛及其衍生物与α-萘酚作用会形成紫红色复合物，因此在糖液和浓硫酸界面有紫环出现。 E.锆-枸橼酸反应：黄酮类化合物分子中有游离的3-OH或5-OH存在时，可与锆盐（ZrOCl2）反应生成黄色的锆络合物，但两种锆络合物对酸的稳定性不同，3-OH、4-酮基络合物的稳定性比5-OH、4-酮基络合物的稳定性强，因此当继续加入枸盐酸后，5-OH黄酮的黄色溶液显著褪色而3-OH黄酮溶液仍呈鲜黄色。 2.重结晶：重结晶通常用于杂质含量在5%以下的产品的纯化，是利用样品和杂质在不同温度同一溶剂中溶解度的不同来达到纯化目的。溶剂要求在温度较低时对所需成分溶解度小而在温度高时对所需成分溶解度大，即样品在该种溶剂中的溶解度随温度变化很大。 3.槲皮素提取分离：本实验是根据槐花米中芦丁经酸水解成游离的槲皮素和糖，而游离槲皮素不溶于水而以沉淀析出，可经过滤分离。再利用槲皮素易溶于乙醇的性质可对其重结晶精制。 4.纸层析法：纸层析是一种分配层析。固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂，混合物各组分在流动相和固定相两种不同溶剂中分配系数差异导致各组分移动距离不同，通过与标准样比对可进行定性分析。 5.薄层层析：使利用硅胶对样品中各成分吸附能力的不同以及展开剂对它们解吸附能力的不同，使各成分离，再可通过与标准品的比对达到定性鉴别的目的。 6.槲皮素五乙酰化物制备：反应方程式见报告。 7.熔点测定的原理及意义：物质自初熔至全熔的温度范围称熔距或熔程。若将毛细管与温度计的水银球紧密靠在一起，则毛细管内被测物质的温度可从温度计上直接读取，这样就可以测出被测物质初熔和全熔时的温度，从而计算出熔距，再与其标准熔距比较，就能鉴别被测物质的纯度，因为纯净的有机物有固定的熔点，熔距很小，仅为0.5～1.0℃，若被测物质含有少量杂质，熔点一般会下降，熔距显著增大。通过测定熔点可以鉴别未知纯粹固态化合物并可根据熔距的长短判断化合物的纯度。 操作： 称取15.5g槐花米粗研碎破壳。取0.5g研碎后的粉末加10ml95%乙醇于70摄氏度水浴15min，过滤，取滤液进行预试反应，结果如下： 2. 将1.03g硼砂加入300ml沸水中搅匀后，把研碎后的其余槐花米粗粉（15.00g）加入其中，立即用新鲜石灰乳调至PH 8，保持此PH微沸30min（需不断补充蒸发掉的水分）。趁热用尼龙布拧挤过滤，得咖啡色滤液250ml，滤液在60-70摄氏度下用浓盐酸调至PH4，放置一周。小心倾倒上清液，抽滤，得泥黄固体，用约230ml沸水将其溶解（逐加法）至饱和，再多加25ml沸水（抛加10%-20%溶剂）以防止热过滤过程中由于温度降低析出固体。溶解过程中溶液颜色变化为：淡黄色浑浊—棕红色微浑浊。趁热过滤除去难溶性杂质，滤液静置自然冷却，抽滤除去易溶性杂质，得淡黄色固体，洗涤，干燥。 3.将烘干的产品称重，描述形状并计算产率。结果如下： 名称：黄酮苷纯品 性状：黄色片状 重量：1.92g 产率：12.8% 4. 称取所得的黄酮苷纯品1.00g，稍加研碎后转入150ml圆底烧瓶中，加入80ml2%硫酸，保持微沸1h， 冷水浴冷静置，抽滤，得黄色固体（粗制苷元）和浅黄色澄清滤液（糖液）。 5.固体用水至中性，用40ml乙醇-水（1:1）混合溶剂加热回流溶解制成饱和溶液，再抛加8ml（15%-20%）。趁热过滤除去不溶液杂质，滤液用冰水浴静置后抽滤除去可溶性杂