荧光分光光度法测定维生素B2.pptVIP

维生素B2 荧光发射 处于第一激发单重态中的电子跃回至基态各振动能级时，将得到最大波长为λ3的荧光。很明显，λ3的波长较激发波长λ1或λ2都长，而且不论电子开始被激发至什么高能级，最终将只发射出波长λ3为的荧光。荧光的产生在10-7-10-9s内完成。 荧光、磷光 能级图 实验内容 1. 标准曲线的制作 维生素B2系列标准液的配制：操作规范 灵敏度选择：（旧仪器统一选10，新仪器选4） 滤光片的选择：Fs-F0最大 标准曲线的绘制： c 对 Fs- F0作图，线性 2. 样品含量的测定 样品溶液的制备（称量，定容，样品处理，最后定容） 样本的测定及浓度计算 实验注意事项 基本操作要规范： 吸量管的使用，溶液转移，定容 试剂取后，得放回原处 保持试验台整洁 二、吸量管 吸量管的全称是“分度吸量管”，它是带有分度的量出式量器（带刻度的移液管。 吸量管的使用方法与移液管大致相同。 实验注意事项 基本操作要规范： 吸量管的使用，溶液转移，定容 试剂取后，得放回原处 保持试验台整洁 * * * 仪器分析实验 维生素B2的测定 维生素B2, 又称核黄素，为橙色结晶性粉末。 荧光测定的依据： 1. 结构与荧光的关系 2. F =2.3 ? I0 abc 当入射光强度I0 和光程一定时，上式为： F = K c 即荧光强度与荧光物质的浓度成之正比，但这种线性关系只有在极稀的溶液中。对于较浓溶液，由于猝灭现象和自吸收等原因，使荧光强度和浓度不呈线性关系。 标准曲线法 荧光强度 vs.浓度标准曲线 荧光强度 核黄素浓度 样本 激发 滤光片 发射滤光片 Fs- F0最大 最大的激发波长 最大的发射波长 S0 S1 S2 T1 吸光?1 吸光?2 荧光?3 Fs-F0 F0 Fs 530 480 400 360 第一片滤光片（兰字）λ（nm） Fs-F0 F0 Fs 600 550 510 470 450 420 第二片滤光片λ（nm） 固定第二片滤光片λ（nm）： 固定第一片滤光片λ（nm）： 移液管的使用 常见移液管：标有温度和容量(注意是否标有吹) 用途：准确移取一定体积的液体 操作：洗涤(蒸馏水)、润洗(3次)、移液、洗涤干净 注意事项：1、整个操作过程中，保持移液管的垂直；2、读数时视线与凹液面平齐 溶液下端1-2cm *