水产品中残留呋喃唑酮间接竞争酶联免疫检测（ciELISA）方法建立和氯霉素抗血清制备的研究.pdfVIP

水产品中残留呋喃唑酮间接竞争酶联免疫检测(cieLIsA)方法建立和氧霉素抗血清制备的研究 法建立和氯霉素抗血清制备的研究 摘要 原，免疫原注射免疫新西兰白兔获得呋喃唑酮多抗血清，建立了快速检测水产品 中残留呋喃唑酮的ELISA方法，并通过对比实验，对检测过程中的各项反应条件 疫原注射免疫新西兰白兔以获得氯霉素多抗血清，同时对抗血清质量进行了鉴定。 第一部分中建立呋喃唑酮间接竞争ELISA法的研究内容在国内属首次报道。第二 本内容为本实验室建立快速检测组织中残留氯霉素的ELISA方法奠定了基础。 研究方法和结果如下：用重氮化法将Fz与载体蛋白BSA偶联制各人工抗原 Fz—BsA，以此用作免疫原，同法合成包被抗原Fz—HSA。选择常规免疫程序， 免疫2～3月龄新西兰白兔，获得多抗FZ抗血清，结果表明抗血清特异性针对FZ。 用间接竞争ELISA法对抗血清进行了效价的测定，结果表明抗血清阳性滴度为 光值较低，而对Fz—HsA包被孔吸光值较高，表明抗血清中存在抗Fz抗体。以 上结果表明所获得的抗血清基本符合实验要求。 用所制备的抗血清建立了间接竞争ELISA方法。利用对比实验，优化了ELISA 的工作条件，方阵滴定法确定的理想呋喃唑酮一人血清白蛋白(FZ—HSA)包被抗原 准溶液作为检测对象，绘制了标准曲线，从标准曲线可以得知，此方法可测定的 水产晶中残留呋喃唑酮间接竞争酶联免疫检测(ciELISA)方法建立和氯霉紊抗血清制备的研究 方法的精确度以批内误差(孔间差异)和批间误差(板间差异)来表示，结果表明孑L间 差异和板间平均差异分别为4．16％和9．20％，这表明方法精确度较好。添加回收率 试验测褥虾肉样本均回收率为94．86％4-9。55％。在可测定浓度范围内，呋哺唑酮(F乃 时使用而导致共同残留的抗微生物药物未显示免疫交叉反应性，与结构相似物呋 选择性，适合呋喃唑酮药物残留样本的快速筛选。 氯霉素抗血清制备和鉴定实验中人工抗原合成及抗血清制备的方法基本同上， 但考虑到氯霉素分子的化学结构不同于呋喃唑酮以及结合其他学者的研究结论， 将氯霉素与载体蛋13偶联的方法改为采用混合酸酐法。结果表明所制备的氯霉素 抗血清质量一般：抗体效价～般，阳性滴度(ciELISA法)为l：3200；抗体的特异性 一般。其原因可能是人工抗原合成效果不佳或抗体纯化不够所至。本次试验虽没 有取得预期结果，但在实验方法和步骤上的摸索，对本实验室将来建立氯霉素残 留的酶联免疫检测方法打下了一个基础。 关键词：呋喃唑酮氯霉素药物残留 间接竞争酶联免疫检测 查兰曼±塾叟堕堕些墅囹堡童兰堕壁墨壅丝望!型!坚!垒堕鳖壅皇塑壑兰茎垫垒塑型墨堕竺茎—一 fortheDetectionof ofciELISA Establishment 7rhe onthe Study Productandthe of Marine Residuein Furazolidone Preparation to Antiserum Chloramphenicol Abs仃act the toestablish into covers articlecarlbedividedtwo This parts，onepart topicoftrying for