高效液相色谱一荧光检测法测定血清苯丙氨酸和酪氨酸及其临床应用.pdfVIP

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2017-10-13 发布于上海
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高效液相色谱一荧光检测法测定血清苯丙氨酸和酪氨酸及其临床应用.pdf

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高效液相色谱一荧光检测法测定血清苯丙氨酸和酪氨酸及其临床应用

摘要目的高效液相色谱能同时测定血清苯丙氨酸(Phe)和酪氨酸 (Tyr)，并具有分离效能高、选择性强、快速的特点，已成为Phe和 Tyr测定的有效手段之一。本课题建立高效液相色谱一荧光法尿症筛查中的临床应用价值。方法血清标本与等量5％(V／V)高氯酸溶液混合后去除蛋白质，不需要荧光衍生，取上清液20“l直接进样，由HypersilC8色谱柱(6．0 mmX 300nllTl，10 gm)分离，流动相为乙腈一水(体积比10：90)， nlTl、发射光波长303 ml／min，柱温25C，在激发光波长210 流速1．0 nm的条件下，采用外标法定量测定Phe和Tyr，整个分析过程可在 30min内完成。结果从检测波长的选择、流动相中有机相比例、pH值、流速及柱温各方面考察了最优色谱操作条件。血清标本色谱图中Phe和Tyr 均达到基线分离，Phe线性范围为12．2～1220．0 pmol／L，最低检测限为3 I_tmol／L，最低检测限为均回收率102．5％；Tyr线性范围为5．5-550．0 0．8 色氨酸、5．羟色胺、5．羟吲哚乙酸等物质不干扰实验。该法的测定值 P=0．772； P=0．894，Tyr 与HPLC．紫外法测定值进行配对f-检验，Phe (P=O．000)，表明两法的测定结果具有很好的可比性。 P=0．721，PheP=0．349)。14例PKU患 Tyr浓度均无性别差异(Tyr lamol／L，Phefryr值41．78+16．79。结论HPLC．FLD能同时测定血清Phe和Tyr浓度，简便、快速、特异性好，适于苯丙酮尿症的筛查和疗效监测。同时，建立了此法儿童年龄段的正常参考值范围。关键词高效液相色谱，荧光法，氨基酸，苯丙酮尿症，新生儿筛查 Il ABSTRACT objective：A highperformance liquid methodwas describedtodeterminate and inserum． phenylalaninetyrosine Thenitwasusedasanaccurateand for method of quick screening phenylketonuria(PKU)． Methods：Serumwith acidwas separated precipitated5％perchloric abase—deactivatedcolumnwim10％acetonitrilein isocraticallyusing Cs waterasthemobile flowrateWas1