吖啶橙荧光染色法在循环肿瘤细胞筛查中的应用.pdfVIP

792 TianjinMedJ,July2015,Vol.43No.7 诊断技术 吖啶橙荧光染色法在循环肿瘤细胞筛查中的应用 △ 刘敏，马富玲 ，韩荣，李美，刘淑芬，张淑敏 摘要：目的 应用吖啶橙荧光（AO-F）染色法搭建循环肿瘤细胞（CTCs）筛选平台，并将其应用于肾癌患者外周 血CTCs筛查。方法 选择转移性肾细胞癌患者27例（研究组），用不同浓度的血清培养肾癌原代肿瘤细胞和细胞 系769-P，分别制备涂片于荧光显微镜下，观察细胞形态及着色情况是否一致；随机计数5个视野下AO-F 阳性（+） 细胞占769-P细胞的比例，评估AO-F染料对肿瘤细胞的敏感性；清晨抽取10例健康体检者（对照组）空腹外周血， 6 红细胞裂解后富集单个核细胞，配制含1×10个细胞的悬液；取对数生长期肾肿瘤细胞，配制成每管分别含500、200、 6 100、50、10个肿瘤细胞的悬液，与1×10个单个核细胞混合，建立肾癌外周血CTCs模型，AO-F染色后计算肿瘤细胞 回收率；另计算2组外周血AO-F+细胞的检出率，分析其与患者临床参数之间的关系。结果 肾癌原代肿瘤细胞和 细胞系769-P均呈现出鲜明色彩，两者具有相似的形态学特征，平均每个视野下AO-F+细胞占肿瘤细胞的比例为 93%±3%。含500、200、100、50个细胞的悬液组肿瘤细胞回收率（%）分别为 10.2±3.8、9.2±2.3、10.8±2.6、10.5±1.9，组 间差异无统计学意义（P0.05）。含 10个细胞的悬液组偶然可检测到AO-F+细胞。对照组无一例阳性，研究组9 例检测到AO-F+细胞，检出率为33.33%；检出率在不同年龄、性别、肿瘤大小、病理类型、Furhman分级、转移部位及 带瘤状态间差异均无统计学意义（P0.05）。结论 AO-F染色法筛查肾癌患者外周血CTCs切实可行，并具有高度 的特异性和可重复性，对早期预测肾癌复发转移有一定参考价值。 关键词：吖啶橙；显微镜检查,荧光；癌,肾细胞；循环肿瘤细胞 中图分类号：R737.11；R446-39 文献标志码：A DOI：10.11958/j.issn.0253-9896.2015.07.025 Theapplicationofacridineorangefluorescentstainingmethodincirculatingtumorcell △ LIUMin,MAFuling ,HANRong,LIMei,LIUShufen,ZHANGShumin DepartmentofUrology,TheSecondHospital,TianjinMedicalUniversity,TianjinInstituteofUrinarySurgery,Tianjin300211,China △CorrespondingAuthor E-mail163.com Abstract:Objective Toestablishthescreeningplatformofcirculatingtumorcells(CTCs)usingacridineorangefluo⁃ rescent(AO-F)dyeingmethod,andtoapplyitinthescreeningofperipheralbloodCTCsinpatientswithkidneycancer. Methods Twenty-sevenpatientswithmetastatic