人乳中蛋白质的组成分析.PDF

第２７卷 第９期 应 用 化 学 Ｖｏｌ．２７Ｎｏ．９ ２０１０年９月 　　　　　　　ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＡＰＰＬＩＥＤＣＨＥＭＩＳＴＲＹ　　　　　　　 Ｓｅｐ．２０１０ 人乳中蛋白质的组成分析  石　磊 　刘晓梅　程　舸　王　韶 （吉林大学公共卫生学院　长春 １３００２１） 摘　要　在对人乳样品分离与纯化的基础上，采用“ＢｏｔｔｏｍＵｐ”并结合高效液相色谱（ＨＰＬＣ）和配有纳米喷雾 （Ｎａｎｏｓｐｒａｙ）技术的高分辨傅里叶变换离子回旋共振质谱（ＦＴＩＣＲＭＳ），将人乳各部分蛋白质样品酶解成多 肽片段。利用碰撞活化解离（ＣＡＤ）和电子捕获解离（ＥＣＤ）２种解离方式断裂机理的互补性规律，借助Ｍａｓｃｏｔ 软件数据库，快速分析了人乳样品中乳脂部分、乳清部分和乳粒部分所含主要蛋白质的组成。人乳样品各部 分的共同物性是均含有多种角蛋白、乳白蛋白、乳铁蛋白，但含量和种类各有不同，这既表明了人乳特殊的营 养成分，又从另一角度显示出人乳各个部分营养价值的差异。 关键词　人乳，蛋白质，组成 中图分类号：Ｏ６５５　　　　　文献标识码：Ａ　　　　　文章编号：１００００５１８（２０１０）０９１０９９０６ ＤＯＩ：１０．３７２４／ＳＰ．Ｊ．１０９５．２０１０．９０８５２ 人乳蛋白分乳脂蛋白、乳清蛋白和乳粒蛋白，其中各部分所含蛋白各不相同，乳清蛋白占５０％～ ［１］ ６０％以上，不仅含有丰富的乳铁蛋白和溶菌酶 ，而且还含有多种与疾病的发生与病变相关的蛋白，它 们的组成与含量不仅直接决定其营养价值，其细微结构的变化还能提供某些疾病发生、变化的相关信 ［２］ 息 。传统蛋白质的检测主要采用凝胶电泳、等电聚焦、凯氏定氮法、二维聚丙烯酰胺凝胶电泳（２Ｄ ［３４］ Ｇｅｌ）、亲和层析（ＡｆｆｉｎｉｔｙＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＡＣ）及高效液相色谱分离（ＨＰＬＣ）等方法 。但此类方法程序 复杂，成本高，消耗时间长。具有高分辨率的傅里叶变换离子回旋共振质谱（ＦＴＩＣＲＭＳ），与肽库配合 ［５７］ 应用，已经成为生命科学相关领域不可缺少的工具之一 。ＦＴＩＣＲＭＳ独特的裂解技术，电子捕获解 离（ＥｌｅｃｔｒｏｎＣａｐｔｕｒｅＤｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，ＥＣＤ）不仅可以优先断裂Ｓ—Ｓ和Ｎ—Ｃ键，而且还可以进行蛋白质修 α ［８１０］ 饰后定位 。根据多肽碎片命名规则并结合碰撞活化解离（ＣｏｌｌｉｓｉｏｎａｌＡｃｔｉｖａｔｅｄＤｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，ＣＡＤ） ＣＡＤ和ＥＣＤ这２种解离方式断裂机理的互补性规律，先将蛋白质酶解成多肽再进行分析，可以提供更 多蛋白片段的结构信息，达到１００％的覆盖率［１１１２］，从而提高对蛋白质酶解片段裂解机理鉴定的可信 度［１３１４］。本文采用 “ＢｏｔｔｏｍＵｐ”并结合ＨＰＬＣ和配有Ｎａｎｏｓｐｒａｙ技术的高分辨ＦＴＩＣＲＭＳ等方法，在 对人乳样品分离与纯化的基础上，将各部分人乳蛋白酶解成多肽片段，首次利用ＣＡＤ和ＥＣＤ这２种解 离方式断裂机理上的互补性规律，借助Ｍａｓｃｏｔ软件数据库，在多肽水平上快速分析并鉴定了人乳样品 中乳脂部分、乳清部分和乳粒部分所含蛋白质的组成，并对各部分的差异进行了对比分析。 １　实验部分 １．１　试剂和仪器 胰蛋白酶，柠檬酸，柠檬酸铵，尿素，ＤＤＴ，ＴＦＡ，碘化乙酰胺，乙氰（美国Ｓｉｇｍａ公司），丙烯酰胺，Ｔｒｉｓ ，溴酚兰，考马斯亮兰（中国华美公司）。其它试剂均为分析纯试剂，实验用水为二次蒸馏水。Ｗａｔｅｒｓ ＨＣｌ ２６９５型高压液相色谱（美国Ｗａｔｅｒｓ公司），７．０Ｔ型傅里叶变换离子回旋共振质谱仪（ＦＴＩＣＲＭＳ） （ＦｉｎｎｉｇａｎＬＴＱＦＴ，德国