淡紫拟青霉T-DNA插入突变体的表型分析.pdfVIP

林 业科学研 究 2014，27(2)：219～224 ForestResearch 文章编号：1001—1498(2014)02-0219-06 淡紫拟青霉 T．DNA插入突变体的表型分析 马建伟 ，王曦茁 ，汪来发，王 源，苟大平，王艳菊 (中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所，国家林业局森林保护学重点实验室 北京 100091) 摘要：研究淡紫拟青霉T—DNA插入突变体 ，鉴定突变体的表型特征，为淡紫拟青霉致病机制分析及致病相关的基因 克隆奠定基础。PCR检测筛选的14株T—DNA插入突变体，观察和测定菌落形态，菌落生长速率，产孢量，孢子萌发 率和菌丝干质量等生物学性状，并比较突变体致病力。结果表明突变体均含有beta—tubulin基因序列，T—DNA已整 合进入野生型菌株20—7的基因组中。通过与野生型菌株对比，发现突变体菌落形态发生了不同程度的改变。菌落 生长速率明显增大的菌株 占全部菌株的85．71％，只有 BN一11菌株的菌落生长速率降低。产孢量显著变大的菌株 有 BN一11和 BN一12，为菌株总数的14．29％。孢子萌发率发生改变的菌株 占78．57％。菌丝干质量发生明显增大和 减少的菌株都 占全部突变体的21．43％。筛选获得了1株致病力增强的突变体 BN一11和 11株致病力显著降低的突 变体。 关键词：淡紫拟青霉 ；插入突变；生物学性状；致病力 中图分类号：$769 文献标识码 ：A PhenotypesAnalysisforT-DNA InsertionalM utantsofPaecilomyceslilacinus MAJian—wei，WANGXi-zhuo，WANGLai ，WANG Yuan，GOUDa-ping ，WANG Yah u (ResearchInstituteofForestEcology，EnvironmentandProtection，ChineseAcademyofForestry；TheKeyLaboratory ofForestProtection StateFo sl Admirdstratiga，geljing 100091，Ckkta) Abstract：TheT—DNA insertionalmutantsofPaecilomyceslilacinuswerestudiedandthephenotypeswereidenti— fled．Itmaycontributetounderstandingthepathogenicmechanism ofP．1ilacinusand theclonegenesrelatedto pathogenicity．Allof14mutantsgeneratedbyT—DNA insertionweretestedwithPCR fortheirinsertionalsequence． Themorphology，colonygrowingrate，sporeproduction，conidiagerminationrate，dryweightofmycelium andpath— ogenicityagainstMeloidogyneincongnitaofphenotypesofmutantswereanalyzedbycomparingwithwild。typestrain 20．7．Theresultsdemonstratedthatthegenomesofthesemutantscontainedthesequenceofbeta—tubulingeneand T-DNA hadbeenintegratedintowild—typegenomeofP．1ilacinus．Comparedwithwild-typestrain20—7．themor— phologiesofthese colonieschangedatdifferentdegrees．Thecolonygrowingrateof85．71％ strainsspeededup obviously，onlythe strainBN一11slowed down itscolony growingrate distinctly．Thestrain BN一11andBN一12， accountingf0