SLA-I重链分子的表达及结构分析-河北师范大学学报.PDF

第33 卷/第2 期/ 河北师范大学学报/自然科学版/ Vol.33 No.2 2009 年3 月 JOURNALOFHEBEI NORMAL UNIVERSITY/Natural Science Edition/ Ma r.2009 SLA -I 重链分子的表达及结构分析 高凤山, 　付寅坤 (大连大学 生物工程学院, 辽宁 大连　116622) 摘 要:为研 SLA-Ⅰ重链分子在 pMAL-p2X 载体表达条件, 从培养基pH 值、温度、菌体密度、IPT G 浓度、 时间5 个条件设计了优化条件的实验.SDS筛选出在pMAL-p2X 系统上表达SLA-Ⅰ重链分子的最佳条件, 并运用EXPASY 服务器上的SOPMA 法对 SLA-Ⅰ重链分子和HLA-A2 进行2 级结构的预测, 同时同源模建其3 级结构.结果表明:pH8.0, 37 ℃, 0.2 mmol/L IPTG, 培养5 h, D 600 nm=0.8 是SLA-Ⅰ重链分子蛋白表达的最佳条 件.2 级结构预测和分析发现, 猪和人 MHC Ⅰ类分子重链2 级结构成分上非常相似, 其同源率远远大于氨基酸的同 源率;同源模建发现, 猪和人、小鼠的MHC Ⅰ类分子3 级结构非常相似. 关键词:SLA-Ⅰ重链分子;表达条件;2 级结构;3 级结构 中图分类号:Q 939.91　　　文献标识码:A 　　　文章编号:1000-585 (2009)02-02 -07 主要组织相容性抗原复合体(major histocompatibility complex, MHC)是脊椎动物关键的免疫应答基 [1] [2] 因 .此基因群决定了种群和个体的免疫应答差异, 并与疾病的抗性密切相关 .MHC 分为MHC Ⅰ, Ⅱ和 [3, ] Ⅲ类 .其中, MHC Ⅰ类分子分为重链MHC I 和轻链β2m, 二者以非共价键结合形成一个复合体而结合T [5] 细胞表位 .人的HLA-A 的三维晶体结构已经解析, 由重链的α1 和α2 区形成抗原结合槽, 该结合槽的顶部 为2 个相邻的α螺旋, 底部为8个反向平行的β折叠.此结合槽被分为A ～F 6 个口袋, 结合8 ～ 10 个氨基酸 [6] 残基 . [7] 猪主要组织相容性复合体, 又称猪白细胞抗原(sw ine leukocyte antigen, SLA ) .SLA 也分为3 个主要 类群, 即Ⅰ类区域基因、Ⅱ类区域基因、Ⅲ类区域基因[ 8～ 10] .到目前为止, 猪的SLA-Ⅰ类分子的晶体结构仍 未解析.为今后研 SLA-Ⅰ分子的结构和功能, 高凤山等构建了猪SLA-Ⅰ重链分子在可溶性表达系pMAL [11] -p2X 的表达载体, 并成功进行了表达 .然而, 对于SLA-Ⅰ重链分子相关的优化表达并未开展, 其相应的 分子2 级结构和 3 级结构的详细研 资料有待于进一步深入. 本文中, 笔者进一步研 SLA-Ⅰ重链分子在pMAL-p2X 的表达, 以筛选出其最佳表达条件.同时, 展开 SLA-Ⅰ重链分子2 级结构和3 级结构分子预测, 为今后开展SLA-Ⅰ分子抗原递呈机制和晶体结构等方面 研 奠定基础. 1　材料和方法 1.1　实验材料 表达载体为pMAL-p2X 质粒, 表达菌株为E .coli TB1 菌株. 所用试剂IPTG 为TaKaRa 公司产品;DNA Marker 购自鼎国生物技术公司;低分子量蛋白M arker 购自 上海生物化学研 所;三羟甲基氨基甲烷(Tris-碱)、甘氨酸均购自欣经科生物技术公司;N ′N′-二甲基甲叉双 丙烯酰胺、丙烯酰胺购自华美生物工程公司. 1.2　重组质粒E co R Ⅰ和H in d Ⅲ的双酶切鉴定