(修改)1.1DNA重组技术的基本工具.pptVIP

基因工程 问题探讨： 　　　苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。 　　　让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。 想一想需要做哪些关键工作？ （一）限制性核酸内切酶----“分子手术刀” (1)来源： (2)特点：具有专一性, 主要表现: 一、识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列, 二、切割特定核苷酸序列中的特定位点 (3)作用实质： 使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开（切割DNA分子） 　 A．①②　　　B．②③　　　C．③④　　　D．②④ （二）“分子缝合针”——DNA连接酶 　 (三)“分子运输车” ——基因进入受体细胞的载体 ⒈载体需要的条件： 　　⑴有1~多个限制酶切点 　　⑵对受体细胞无害 　　⑶导入基因能在受体细胞中复制、表达 　　⑷有某些标记基因，便于筛选 (5)结构简单，大小适中。 ⒉常用运载体： 　 ⑴细菌的质粒 　 ⑵噬菌体或某些动植物病毒 1、限制酶是一种核酸切割酶，可辨识并切割DNA分子上特定的核苷酸碱基序列。下图为四种限制酶BamHI，EcoRI，HindⅢ以及BglⅡ的辨识序列。箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端可以互补黏合？其正确的末端互补序列为何？ A. BamHI和EcoRI；末端互补序列—AATT— B. BamHI和HindⅢ；末端互补序列—GATC— C. EcoRI和HindⅢ；末端互补序列—AATT— D. BamHI和BglII；末端互补序列—GATC— * 专题1 主要的技术 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的新生物类型和产品 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 一 基因工程的原理 DNA重组技术和转基因技术 苏云金芽孢杆菌 毒蛋白 普通棉花　　抗虫棉 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二： 抗虫基因与棉花DNA“缝合” 关键步骤三： 抗虫基因进入棉花细胞 “分子缝合针”—— DNA连接酶 “分子运输车”—— 基因进入受体细胞的载体 二、DNA重组技术的基本工具 （4）作用结果： 黏性末端和平末端 EcoR Ⅰ 黏性末端　　　　 黏性末端 限制酶识别序列有何特点？切割 产生的粘性(平)末端又有何特点？ Sma Ⅰ 平末端　　　平末端 1.要想获得某个特定性状的一段基因必须要用限制酶切几个切口？共切了多少个磷酸二酯键？可产生几个黏性(平)末端？ 要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。 思考? 限制酶所识别的序列，可以找到一条中心轴线（如图），中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向、中心对称、重复排列的。 想一想限制酶所识别的序列有什么特点？ T A G G C C A T T A C C G G T A 2．下列四条DNA分子，彼此间粘性末端能用DNA连接酶连接 起来的一组是（ ） ① ② ③ ④　 3.上面所示的四个粘性末端是由多少种限制酶产生的？ ①作用: 把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来. ②作用原理： 催化磷酸二酯键形成 ③类型： 类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 （二）“分子缝合针”——DNA连接酶 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， E·coli DNA连接酶　　　　　　　　或T4DNA连接酶 即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低 T4DNA连接酶 相同点 区别 DNA连接酶 DNA聚合酶 寻根问底 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么? 1)只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键 形成磷酸二酯键 1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 　⑶假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转录，转基因生物能有预