剖析突变体鉴定.pptVIP

T-DNA突变体的鉴定 T-DNA突变体的鉴定 实验目的 1、了解植物DNA的提取。 2、掌握T-DNA插入突变体中纯合体、杂合体的鉴定方法。 T-DNA突变体的鉴定 实验目的 1、了解植物DNA的提取。 2、掌握T-DNA插入突变体中纯合体、杂合体的鉴定方法。 实验原理 Ti质粒是土壤农杆菌的天然质粒,该质粒上有一段特殊的DNA区段,当农杆菌侵染植物细胞时,该DNA区段能自发转移进植物细胞,并插入植物染色体DNA中。Ti质粒上的这一段能转移的DNA被叫做T-DNA。 实验原理 T-DNA插入到植物染色体上的什么位置以及怎样插入都是随机的。外源DNA插入到目的基因后，引起该目的基因的核苷酸组成成分发生变化。三引物法PCR（F、R、LBb1)鉴定突变体植株的T-DNA整合的纯、杂合性。 材料和试剂 野生型拟南芥、T -DNA插入突变体植株。 液氮、 无水乙醇、 酚氯仿溶液、三氯甲烷、超纯水等。 移液枪、枪头、离心机、水浴锅等。 内容 1.突变体与野生型植株的基因组DNA的提取 2.PCR鉴定突变体纯合性、杂合性 1.突变体与野生型