2010-9-和6 第二次分子生物学研究方法.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * 基因的差别表达 根据表达特性的差异可将高等真核生物的基因分为两大类：一类叫做看家基因（house-keeping gene），以其组成型表达模式维持细胞的基本代谢活动；另一类叫做发育调控基因（developmental regulated gene），以其时空特异性表达模式完成个体的正常生长、发育与分化，我们将不同基因在生物个体发育的不同阶段，或是在不同的组织或细胞中发生的按时间、空间进行有序表达的方式称为基因的差别表达（differential expression）。 应用mRNA差别显示技术分离克隆目的基因 1992年，美国波士顿Dena-Farber癌症研究所的两位科学家P. Liang和A. D. Pardee发明了一种叫做mRNA差别显示PCR（mRNA differential display）技术，简称DDRT-PCR，可以从一对不同类型的细胞群体有效地分离并鉴定差别表达的基因。 应用cDNA差示分析法克隆基因 cDNA差示分析法- RDA法 (Representational Difference Analysis) 充分发挥了PCR以指数形式扩增双链DNA模板的特性，通过降低cDNA群体复杂性和更换cDNA两端接头等方法，特异扩增了目的基因片段。 试验对象 （Tester） 供