IL与IL逗驮NK细胞亚.pptVIP

IL-2与IL-15对NK细胞亚群表型和功能的调节作用 组员：聂晓晓 孙昊 孙胜岩 王句斐 王鹏 史彦鹏 摘要： 关键词：IL-2; IL-15; NK 细胞; 表型；细胞毒 原理： 药品与仪器： PBMC 的分离与培养? 无菌抽取正常人外周血, 肝素抗凝, Ficoll 密度梯度法分离PBMC, 培养于含有不同浓度为rhIL-2 或/和rhIL-15 的100 mL/L FCSRPMI 培养液中, 在37 。C, 50mL/L CO2条件下培养3 d。 混合淋巴细胞培养(MLC) 免疫荧光染色和流式细胞术分析( FCM) 收集细胞因子刺激的PBMC 或MLC 细胞, 调整细胞数为1. 0 ×107 mL- 1 , 加入1:20 细胞悬液50 uL ( 用DPBS 稀释) 灭活正常兔血清, 室温作用10 min。加入PE-CD56 和FITC-CD16 进行膜表面双色荧光标记, 对照组加入PE-IgG1 和FITC-IgG1, 4 摄氏度作用30 min。用洗涤液洗涤2 次。加适量固定液, FCM检测。 NK 细胞杀伤水平的检测 收集对数生长期K562 细胞, 调整细胞数为2. 0×106mL- 1, 加入51Cr3. 7 MBq, 37 摄氏度 孵育1. 5 h, 中间每隔15 min 晃动1次。标记完毕后洗涤3 次