原生质毯湾融合技术概述.pptVIP

原生质体融合技术;原生质体融合技术;1、原生质体融合技术发展简介;;2、原生质体的制备;酶解温度对原生质体制备的影响;酶浓度对原生质体制备的影响;酶解时间对原生质体制备的影响;甘氨酸浓度对原生质体制备的影响;渗透压对原生质体制备的影响;2.3原生质体形成率的计算;3、灭活原生质体融合;;灭活机制 目前对灭活原生质体的融合机制还不很清楚。 1）Wright 的损伤互补原则 Wright使用不同的生化药剂分别灭活两株动物细胞，融合后得到了活的杂交细胞，他认为这是由于两株细胞的致死损伤得到了互补的结果。Fodor等热灭活带有标记的 B.megaterium 的二个亲株原生质体，经PEG 诱导后未获得融合子。李焕娄等在研究弗氏链霉菌的株间灭活原生质体融合时发现，当两亲株的原生质体分别用热和紫外线，或都用紫外线灭活，然后进行融合，而两亲株都用热灭活时，未能获得重组体。这些实验都支持了Wright 的损伤互补原则。 ;2）不能互补融合形成重组体的原因 因为紫外线的作用位点主要在原生质体的 DNA 上，而且不同的细胞中作用位置可能有很大差别，这样双亲株原生质体用紫外线灭活或分别用紫外线和温度灭活，融合后损伤可以互补，而双亲株都用热灭活，可能在不同的细胞中作用位点差别不大。所以不能互补融合形成重组体。;3）在单亲灭活原生质体融合中，有人认为可以实现遗传物质的单向传递，被灭活亲株起供体作用。但是在双亲灭活原生质体融合时，二亲株都以零或接近零的存活率被灭活，仍可以相当高的频率形成重组体，说明灭活的原生质体仍可以起到受体作用， 否则不能形成重组体。 因此认为只有损伤互补才能较为圆满地解释灭活融合。;灭活原生质体融合技术的特点;灭活原生质体融合技术的应用;2）重要的是，通过原生质体融合可以用不产生抗生素的链霉菌（Streptomyces spp）筛选到新型抗生素的产生菌。 3） 陈五岭等利用双亲株灭活原生质体融合技术， 结果发现热灭活和紫外灭活的双亲株原生质体在 40 ％PGE 诱导融合 10min，对融合最为有利，为进一步选育广谱高效的新杀虫菌株奠定了基础。 ;;4、原生质体融合;5、原生质体融合技术应用与??望;5.2原生质体融合技术展望 近年来, 灭活原生质体融合、离子束细胞融合、 非对称细 胞融合以及基因重排分子育种等新方法相继提出并应用于微 生物育种, 这是原生质体融合技术的新发展。相信随着技术 的不断完善, 原生质体融合在微生物育种中占有的地位会越 来越重要。