DNS法分析涤氚白质末端氨基酸.pptVIP

DNS法分析蛋白质末端氨基酸 一、实验目的 学习用DNS法分析蛋白质及肽的N-末端，掌握聚酰胺薄膜层析法的实际操作。 二、原理 蛋白质N-末端氨基酸的2-氨基与荧光试剂DNS-Cl(二甲氨基萘磺酰氯)反应后得到Dansyl-蛋白质(二甲氨基萘-5磺氨酰蛋白)，经酸水解，得到Dansyl-氨基酸和各种游离氨基酸。DNS-氨基酸在波长254nm或265nm的紫外光照射下发出强烈的黄绿色荧光，并易于进行色谱分离，用聚酰胺薄膜层析可测出含量仅为10-9-10-l0摩尔的DNS-氨基酸，比FDNB(2，4—二硝基氟苯法)的灵敏度高100倍左右。 实验中所得的DNS-氨基酸比相应的FDNB法得到DNP-氨基酸更稳定，且耐酸水解。 本实验的反应首先在碱性(pH9.5-10.5)条件下，使蛋白质或多肽的N-末端氨基酸与DNS-Cl结合，得到二甲基氨萘-5-磺酰蛋白(DNS-蛋白)。此DNS-蛋白在6mol／l,HCl中水解时，蛋白质中的肽键均发生断裂，得到游离的氨基酸，而N-末端的氨基酸形成DNS-氨基酸。对此DNS-氨基酸进行鉴定，即可确定蛋白质的N-末端氨基酸。 DNS-C1能与所有的氨基酸作用生成具有荧光的衍生物，这些衍生物都相当稳定，在5.7mol／L盐酸溶液中经105℃条件下水解22h，除DNS-色氨酸全部被破坏，DNS-脯氨酸、