微流控芯片对乳腺癌细胞MDA-MB-231的捕获及再培养研究.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３５（６）：４６５３ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 檪 技术与方法 檪 殏 檪 殏檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪 微流控芯片对乳腺癌细胞ＭＤＡＭＢ２３１的 捕获及再培养研究 １，２ １ １ 桑维维 　常亚男 　李　娟 （１中国科学院高能物理研究所　北京　１０００４９　２安徽大学生命科学学院　合肥　２３０６０１） 摘要　目的：利用实验室构建的微流控芯片对乳腺癌细胞（ＭＤＡＭＢ２３１）进行捕获，提高捕获率 并保证细胞活性，实现再培养。抗肿瘤药物阿霉素处理正常培养和再培养的细胞，分析细胞内的 基因表达变化。方法：对微流控芯片进行基底修饰，利用ＭＵＣ１抗原与抗体特异性结合捕获肿瘤细 胞，优化捕获条件提高捕获率。对微流控芯片捕获的细胞进行分离、收集和再培养。用１ｍｏｌ／Ｌ阿 μ 霉素对正常培养和再培养的细胞分别孵育２４ｈ，然后提取ＲＮＡ并逆转录合成ｃＤＮＡ。选择乳腺癌 细胞中高表达及与肿瘤转移相关的基因ＦＮ１、ＩＴＧＡ６和ＬＡＭＢ３设计引物，以ｃＤＮＡ为模板分别进行 ＲＴＰＣＲ扩增，对琼脂糖凝胶电泳结果进行灰度分析。结果：经ＭＵＣ１抗体修饰的微流控芯片能有效地 捕获肿瘤细胞，捕获率达８０％±３％，释放率约９８％，细胞释放后存活率高实现再培养。阿霉素对正常培 养和再培养的乳腺癌细胞中ＦＮ１、ＩＴＧＡ６和ＬＡＭＢ３的基因表达均有抑制作用。结论：ＭＵＣ１抗体修饰的 微流控芯片能有效捕获乳腺癌细胞并实现再培养，捕获前后细胞内基因表达无显著差异，均能产生药物 敏感性。 关键词　微流控芯片　捕获再培养　阿霉素　ＭＤＡＭＢ２３１ 中图分类号　Ｑ８１９ 　　Ａｓｈｗｏｒｔｈ在因癌症死亡的患者外周血中发现了类 行快速检测和操控的技术［４］。它具有可控的单元集成 似肿瘤的细胞，首次提出循环肿瘤细胞（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ 模式和微尺度结构，可实现样品处理、捕获和检测一体 ｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ ［１］ 化，降低试剂和样品量的消耗，实现快速、高效、高通量 ，ＣＴＣｓ）的概念 ，即从原位肿瘤脱落进入外 ［２］ 的分析，获得更多有关 ［５］ 周血循环的癌细胞 。同时，ＣＴＣｓ与原位肿瘤一样是 ＣＴＣｓ的信息 。通过芯片的抗 高度异质化的，一些细胞甚至表现出肿瘤干细胞的特 体修饰，利用抗原抗体结合的方法，可实现对人乳腺肿 ７ 瘤细胞 ＭＤＡＭＢ２３１进行特异性捕获和研究。ＭＵＣ１ 性。在外周血中ＣＴＣｓ数目极少，一般约１０数量级血 ［３］ 抗体是一类高分子糖蛋白，正常细胞低表达，在癌组织 细胞中的ＣＴＣｓ仅为个数 ，因此将其从血液中分离并 进行检测在技术上具有挑战性。研究者们一直希望通 中存在畸形糖基化和糖基化不完全，使 ＭＵＣ１的核心 过捕获ＣＴＣｓ后再培养，分析确定它们的遗传分型和药 蛋白暴露出新的蛋白表位或新的糖抗原并分布在整个 ［６］ 物敏感性，从而有效指导临床治疗。 癌细胞表面，可被特异性抗体识别 。ＭＵＣ１与腺