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细胞水平的检测 分子水平的检测 基因水平的检测 2.淋巴细胞及其亚群检测 直接免疫荧光法 间接免疫荧光法 免疫组织化学法 葡萄球菌花环法 微量细胞毒试验 检测CD5分子 T细胞功能的检测 T淋巴细胞增殖试验 1. 原理： 2. 淋巴细胞转化的刺激物 非特异性刺激物： PHA ------T细胞 ConA -------T细胞 PWM -------T、 B细胞 LPS -------B细胞 特异性刺激物： 异种抗原 同种组织抗原 3. 检测方法 T细胞分泌功能测定 体外培养T细胞----各种丝裂原或抗原刺激----分泌各种细胞因子----借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术----分别检测细胞因子含量、生物学活性或基因表达水平，以反映T细胞功能。 T细胞介导的细胞毒试验 1.原理： 体内试验 特异性抗原皮肤试验 PHA皮肤试验 接触性超敏反应 B细胞功能检测 NK细胞活性测定 吞噬细胞功能检测技术 吞噬细胞的吞噬活动大体分为趋化、吞噬和胞内杀灭作用三个阶段，据此建立相应的检测方法。 一、中性粒细胞功能检测技术 二、巨噬细胞功能检测技术 中性粒细胞功能的检测 琼脂糖平板法 巨噬细胞功能检测 1.炭粒廓清试验 2.吞噬功能检测 吞噬颗粒：鸡红细胞(CRBC) 、白色念珠菌、酵母细胞等 人巨噬细胞：斑蟊敷贴法收集 鼠巨噬细胞：腹腔渗出液 3.巨噬细胞溶酶体酶的测定 酸性磷酸酶的测定 硝酸铅法 β-甘油磷酸钠 磷酸盐 偶氮法 α-萘磷酸钠 萘酚和磷酸盐 非特异性酯酶的测定 常用α-萘醋酸法 4. 细胞毒作用测定 IFN-γ+ 小鼠巨噬细胞+125I-UdR标记瘤细胞 （DBA/2小鼠肥大细胞瘤P815） 观察瘤杀伤活性 5. 巨噬细胞促凝血活性测定 激活巨噬细胞可产生一种与膜结合的凝血活性因子，加速正常血浆的凝固； 反映机体免疫功能状态。 肿瘤、免疫缺陷病等疾病的诊断和疾病预后监测。 组织器官移植后对受者的细胞免疫学功能监测则有利于排斥反应的早期发现，以便及时采取有效措施。 三、免疫相关基因检测 细胞因子基因组DNA或mRNA检测 Northern杂交分析 原位杂交法 PCR扩增产物杂交分析 BCR及TCR克隆性基因重排分析 Southern印迹杂交法 PCR扩增技术 HLA等位基因分型技术 序列特异性寡核苷酸探针 单链构象多态性 1.标记免疫分析的发展过程 2.标记免疫分析的分类 免疫组织化学技术 一.免疫荧光细胞化学技术--常用荧光素 一.免疫荧光细胞化学技术--常用方法1 一.免疫荧光组织化学技术--常用方法2 一.免疫荧光组织化学技术--常用方法3 一.免疫荧光组织化学技术--常用方法4 一.免疫荧光组织化学技术--常用方法4 二.免疫酶组化技术 酶标记法--常用酶 酶标记抗体免疫组化—常用方法1 酶标记抗体免疫组化—常用方法2 酶标记抗体免疫组化—常用方法3 非标记抗体--常用酶 非标记抗体免疫酶组化—常用方法1 非标记抗体免疫酶组化—常用方法2 非标记抗体免疫酶组化—常用方法3 非标记抗体免疫酶组化—常用方法4 三.亲合免疫组织化学技术—常用方法 三.亲合免疫组织化学技术—常用方法 四.免疫金银及铁标记免疫组化技术 免疫组织化学技术的应用 荧光免疫组化技术的应用 自身免疫疾病 细菌和病毒的快速鉴定 寄生虫的检测与研究 流式细胞术 激光共聚焦技术 酶免疫组化技术的应用 提高病理诊断准确性 癌基因蛋白的检测 对肿瘤细胞增生程度的评价 发现微小转移灶 在肿瘤分期上的