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 培养基的配制及质量控制 2010年3月 一、培养基的配制 培养基是绝大多数微生物试验的基础。因此，培养基的质量是微生物试验成功与否的关键因素。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。 ⑴培养基可按处方制备也可使用按处方生产的符合规定的商品化成品培养基，脱水培养基除附有处方和使用说明外还应注明有效期、贮存条件、适用性试验的质控菌株和用途。配制时应按使用说明上的要求操作，受潮结块不能使用，以确保培养基的质量符合要求。 ⑵使用容器 配制培养基使用的容器应是玻璃器皿或搪瓷器皿如搪瓷筒、量筒、漏斗、三角烧瓶、刻度吸管、试管、培养皿等。 禁用金属容器如铁、铜、铝容器，避免金属离子与培养基成分结合，生成有害物质，影响细菌生长。 ⑶使用的器皿应 洗净，用蒸馏水或纯化水完全冲洗以消除清洁剂和外来物质的残留，并进行清除污物的确认后方可使用。 若于非洁净的玻璃器皿中制备，可能导致抑菌物质进入培养基中。抑菌物质可能是残留的玻璃器皿清洁用的清洁剂或之前玻璃器皿所盛装的物质。 ⑷ 配制培养基最常用的溶剂是纯化水，特殊情况下需要用去离子水和蒸馏水，对热敏感的培养基应用灭菌水和无菌容器配制与分装，配制时若需加热助溶应注意温度不要过高。 ⑸对配制培养基的过程作详细的记录，记录内容包括：配制日期、培养基名称、成分、配制数量、质量监控结果等进行全面详细记录。 1、培养基的制备方法 称量 为保证培养基质量的稳定可靠，在配制培养基时，在称量前要详细了解处方和使用说明，按照产品说明书的规定称量，各称量物的重量应记录。 各脱水培养基或组成培养基的组分应准确称量，并要求有一定的精确度。 配制 将准确称量的各组分或脱水培养基加入溶剂中，完全溶解，如需要可适当加热。所有的培养基对热都有或多或少的敏感，因此当培养基需要加热溶解时，应注意不要加热过度，否则会使培养基颜色变深。 配制培养基所用的器具应能方便控制加热和不断搅拌。当培养基需要添加其它组分时，添加后也应将其充分混匀。 分装 ⑴配制的培养基根据试验需要分装试管、倾注平皿、制备斜面（高层短斜面或低层高斜面）。 经灭菌的培养基分装，应在无菌环境下按无菌要求操作，避免污染。 ⑵对热敏感的培养基如糖发酵培养基其分装容器一般应预先进行灭菌，以保证培养基的无菌性。 矫正pH 配制培养基必须矫正pH，干燥培养基也必须对pH进行验证，高压灭菌前的pH应比最终pH值高0.2左右。矫正pH后的培养基应加热、过滤，使培养基澄清。  2、培养基的灭菌 灭菌方法及条件不当可直接影响培养基质量，培养基灭菌方法和条件，应通過无菌性试验和促生长试验进行验证，验证方法同《中國药典2010年版》附录灭菌法。商品化的成品培养基或自配的培养基若采用不适当的加热和灭菌条件，有可能引起颜色变化、透明度降低、琼脂凝固力或PH的变化，而不符合培养基质量的要求。 培养基的灭菌应按照生产商提供或使用者验证的参数进行。商品化的成品培养基必须附有所用灭菌方法的资料。 不同种类培养基应采用不同的灭菌方法，配制好的培养基灭菌一般多用流通蒸汽灭菌和滤膜过滤除菌。 流通蒸汽灭菌是最常用的最有效的灭菌法， 121℃，15min( 121℃，30min)或116℃，40min可杀死所有的细菌芽孢。 滤膜过滤除菌 如配制的培养基含有不耐热成分可采用滤膜过滤除菌和血清凝固器除菌。 滤膜过滤除菌采用孔径0.22um的滤膜过滤器，滤膜材质依过滤物品的性质及目的而定。不得对被滤过成分有吸附作用，不得有物质释放和纤维的脱落，也不得使用含有石棉的滤器。滤器和滤膜在使用前应进行验证，并进行灭菌。 血清凝固器80～100℃、30min，连续三天，间歇灭菌。 3、培养基的贮藏 　　 ⑴商品化培养基应根据使用说明书上的要求进行储存。培养基标签上应标有批号，生产日期、有效期及培养基的有关特性。所采用的保藏和运输条件应使培养基最低限度失去水分并提供机械保护。 脱水培养基或单独配方组分应在适当的条件下贮存，如低温、干燥和避光，所有的容器应密闭，尤其是盛有脱水培养基的容器. 　　⑵ 配制好的培养基应验证的条件下贮藏