样品前处理与技术.pptVIP

第二步 上样 Sample Analyze: HPLC, GC, etc. Prepare: Homogenize, suspend, centrifuge, etc Load onto conditioned cartridge Wash off weakly retained substances with weak solvent Elute product with stong solvent 可能出现的问题及解决办法 可能出现的问题 解决办法 固相萃取小柱活化不当 活化，注意：不要抽干 被分析物保留差或不保留 以较弱溶剂稀释上样；或使用强吸附剂；或使用较大SPE柱 基质性质改变 加入缓冲盐，保持pH值/离子强度 体积过载 减少上样体积；或使用较大SPE柱 质量过载 减少上样量；或使用较大SPE柱 第三步 淋洗（Wash） Sample Analyze: HPLC, GC, etc. Prepare: Homogenize, suspend, centrifuge, etc Load onto conditioned cartridge Wash off weakly retained substances with weak solvent Elute product with strong solvent 可能出现的问题及解决办法 可能出现的问题 解决办法 被分析物弱保留或不保留 使用强吸附剂；或使用较大SPE柱 基质性质改变 加入缓冲盐，保持pH值/离子强度 体积过载 减少上样体积；或使用较大SPE柱 质量过载 减少上样量；或使用较大SPE柱 第四步 洗脱（Elute） Sample Analyze: HPLC, GC, etc. Prepare: Homogenize, suspend, centrifuge, etc Load onto conditioned cartridge Wash off weakly retained substances with weak solvent Elute product with strong solvent 可能出现的问题及解决办法 可能出现的问题 解决办法 被分析物过强保留 使用强洗脱剂；或增加洗脱剂用量 亲硅醇基效应（silanophilic interactions ） 改变洗脱剂pH值，提高洗脱剂的H-bonding强度；或加入竞争胺 共流出 改换SPE分离模式 还需注意！ 流速：不宜过快，以免化合物和吸附剂之间没有足够的时间进行相互作用 流速差异可能造成重现性差。 活化： 25 mL/min 上样和洗脱： 10 mL/min 离子交换色谱：推荐1~2 mL/min 样品容量 100 mg（指被分析物而非仅仅感兴趣的化合物） 其它问题 低回收率 SPE柱未充分活化 被分析物吸附过差（体积过载） 样品质量过载 不完全洗脱 强吸附——被分析物吸附于基质 重现性差 基质变异 pH值，离子强度，特异/非特异性吸附 方法不耐受 操作误差 SPE 过程化 实例 三聚氰胺 SampliQ SCX HPLC 和 SPE 的区别 HPLC SPE Partical size 5 μm 40~80 μm Packed bed efficiency High Low Extra-colum volume Low High Column length 5~30 cm 1 cm Number of plates（N） 5000 ~50 Bottom line 可分离结构相似的化合物 要求被分离组分对吸附剂有明确选择性 * 除去杂质（与本分析无关的物质） * 除去杂质（与本分析无关的物质） * 我们感兴趣的目标分析物在萃取溶剂中的溶解度更大 现代分析检测技术 现代分析检测技术 中国科学院植物研究所 色质分析样品前处理（一） 第十五章 样品前处理技术 色谱分析主要步骤 概述 数据处理 结果表达 样品采集 样品前处理 色谱仪分析 前处理是指在获得具有代表性的样品之后，采用合适的样品分解和溶解的方法，使被测组分转变成可测定的形式。 例如 前处理方法建立前应了解 能得到的仪器和设备 了解被测物： 物理化学性质：溶解度，挥发性，活性基团等 浓度范围以及所需的检测低限 样品基质的物理和化学形式 能得到的样品量 样品前处理过程潜在的交叉污染 前处理方法的选择和确定 与分析人员沟通，共同建立分析方法！ 利用文献方法（推荐） 需要验证，重现 成本低，速度快，但可能难以找到现成的文献支持 建立新方法，需进行方法学考察 方法学开发成本高：成本需数千至数万元 方法学建立过程耗时：数周至数月，繁琐，复杂 误区 主要内容 样品的采集 1 常见样品制备技术及选