植物提取物中苯并a芘的测定液相色谱-荧光检测法.doc

ICS?????? 点击此处添加中国标准文献分类号 ????? DB?? 陕 西 省 食 品 安 全 地方标准 DB XX/ XXXXX—XXXX ????? 植物提取物中苯并（a）芘的测定 液相色谱-荧光检测法 Determination of Benzo (a) pyrene in Plant Extracts by Liquid Chromatography with Fluorescence Detection 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 （本稿完成日期：） XXXX - XX - XX发布 XXXX - XX - XX实施 陕西省卫生和计划生育委员会???发布 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准的附录A、附录B均为资料性附录。 本标准由陕西省卫生和计划生育委员会发布并归口。 本标准由中华人民共和国陕西出入境检验检验局提出并负责起草。 本标准主要起草人：孔祥虹、何强、刘开、张璐、邹阳、李建华、李莹、付骋宇、吴双民 本标准为首次发布。 植物提取物中苯并（a）芘的测定 液相色谱-荧光检测法 1 范围 本标准规定了植物提取物中苯并（a）芘残留量的液相色谱-荧光检测法。 本标准适用于生姜、a）芘残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 原理 试样经正己烷提取，用硅胶固相萃取柱和聚苯乙烯-二乙烯基苯a）芘是一种已知的强致癌物质，应注意危险品操作规则。 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682中规定的一级水。 4.1 正己烷：色谱纯。 4.2 二氯甲烷：色谱纯。 4.3 乙腈；色谱纯。 4.4 正己烷-二氯甲烷（3 + 1，V/V）：量取300 mL正己烷与100 mL二氯甲烷混合均匀。 （95 + 5，V/V）：量取950 mL乙腈与50 mL水混合均匀。a）芘标准物质：（Benzo(a)pyreneC20H12，CAS: 50-32-8）：纯度≥99。a）芘标准储备溶液1 mg/mL）：准确称取苯并（a）芘标准物质10 mg，用定容至10 mL，摇匀，0 ℃～4 ℃避光保存，有效期1年。a）芘标准中间溶液（1.0 ?g/mL）：准确0.025 mL，于25 mL容量瓶中，用乙腈溶解，定容于25 mL，0 ℃～4 ℃避光保存，有效期6个月。 4.9 苯并（a）芘标准使用溶液：将苯并（a）芘标准中间溶液根据需要用乙腈。1 g，6 mL使用前依次用5 mL二氯甲烷、10 mL正己烷活化，保持柱体湿润。 聚苯乙烯-二乙烯基苯Bond Elut ENV柱，500 mg，6 mL）：使用前依次用5 mL二氯甲烷、10 mL正己烷活化，保持柱体湿润。 4.10.22 (m，有机系0.01 mg。 5.3 天平：感量0.01 g。 5.4 涡旋混匀器。 5.5 超声波清洗器。 5.6 离心机：5000 r/min。 5.7 固相萃取装置。 5.8 旋转蒸发器。 6 试样制备与保存 取有代表性样品200 g，混合均匀，装入洁净容器中，密闭并标明标记，常温保存。 1g（精确至0.01g）加入10 mL正己烷，涡旋混匀，超声提取30 min，4000 r/min离心5 min，取正己烷溶液于100 mL，用10mL正己烷重复取2次，合并正己烷取液，于40 ℃减压浓缩至约5 mL，待净化。 硅胶固相萃取柱串接在聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱上方，取样品上样，用约5 mL正己烷洗涤，洗涤液合并上样，再用15 mL正己烷淋洗，弃去硅胶固相萃取柱，用5 mL正己烷-二氯甲烷溶液（4.4）洗脱聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱，整个净化过程保持流速2~3 mL/min，收集洗脱液，于40 ℃减压浓缩至干，1 mL乙腈溶解定容，过0.22 (m微孔滤膜，供液相色谱检测。 配制浓度为1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0 ng/mL的苯并芘系列标准溶液，按规定的液相色谱条件进样检测，以苯并（a）芘标准浓度（X，ng/mL）为横坐标，苯并（a）芘（Y）为纵坐标作图，用最小二乘法进行线性回归，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数。 色谱柱：多环芳烃专用液相色谱柱，粒径5 ?m，250 mm×4.6 mm（内径），或相当者； 流动相：乙腈-水（95 + 5，V/V）等度洗脱； 柱温：35 oC； 激发波长：384 nm；发射波长：406 nm； 流速