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■ HPLC的特点和实际应用 1. 固定相与装柱方法的选择： 选粒径小的、分布均匀的球形固定相 （?≤10μm） 首选化学键合相，匀浆法装柱 2. 流动相及其流速的选择： 流动相选粘度小，低流速——甲醇，约 1ml/min 3. 柱温的选择：选室温250C左右 液相色谱 高效液相色谱仪主要部件 1．泵： 恒压泵； 恒流泵：常用 2．进样装置 1）隔膜进样；2）阀进样 3．色谱柱：直径4~6mm, 柱长10~30cm 4．检测器 1）紫外检测器； 2）荧光检测器； 3）示差折光检测器； 4）电化学检测器 （1）色谱柱的选择 1、正相色谱 正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）。由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）极性较强，因而流动相也必须是高极性溶剂，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。 2、反相色谱 反相色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合官能团极性相对较弱。反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。 样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。 常用的反相填料有：C18(ODS)、C8(MO