倒立萤光显微镜Inverted-逢甲共仪-逢甲大学.PDF

逢甲大學研發處共同貴重儀器中心 Feng Chia University Precision Instrument Support Center 文件類別 Type 名稱 TITLE 文件編號SPEC NO 版次 REV. 頁次 Page 儀器基本原理 倒立螢光顯微鏡 (IFM) PISC0020-A-001 1 Page 1 of 8 倒立螢光顯微鏡 (Inverted FluorescenceMicroscope) 一. 光學顯微鏡介紹 荷蘭人安東尼 ·凡·列文虎克是第一個製造光學顯微鏡並使用它做科學觀察的人。由物體入 射的光被至少兩個光學系統（物鏡和目鏡）放大。首先物鏡產生一個被放大實像，人眼通過 作用相當於放大鏡的目鏡觀察這個已經被放大了的實像。一般的光學顯微鏡有多個可以替換 的物鏡，這樣觀察者可以按需要更換放大倍數。這些物鏡一般被安置在一個可以轉動的物鏡 盤上，轉動物鏡盤就可以使不同的目鏡方便地進入光路，物鏡盤的英文是 Nosepiece ，又譯作 鼻輪。 十八世紀，光學顯微鏡的放大倍率已經提高到了 1000倍，使人們能用眼睛看清微生物體 的形態、大小和一些內部結構。直到物理學家發現了放大倍率與解析度之間的規律，人們才 知道光學顯微鏡的解析度是有極限的，解析度的這一極限限制了放大倍率的無限提高， 1600 倍成了光學顯微鏡放大倍率的最高極限，使得形態學的應用在許多領域受到了很大限制。 光學顯微鏡的儀器裝置簡便，其成像原理是利用可見光照射在試片表面造成局部散射或 反射來形成不同的對比，然而因為可見光的波長高達 4000-7000 埃，在解析度 或謂鑑別率、 ( 解像能，係指兩點能被分辨的最近距離 )的考量上自然是最差的。在一般的操作下，由於肉 眼的鑑別率僅有 0.2 mm ，當光學顯微鏡的最佳解析度只有0.2 um時，理論上的最高放大倍 率只有 1000 X ，放大倍率有限，但視野卻反而是各種成像系統中最大的，這說明了光學顯微 鏡的觀察事實上仍能提供許多初步的結構資料。下表為習用光學顯微鏡與掃描式電子顯微鏡 在解析度上之比較表。 本文件之智慧財產權屬逢甲大學共同貴重儀器中心所有，請勿翻印。 逢甲大學研發處共同貴重儀器中心 Feng Chia University Precision Instrument Support Center 文件類別 Type 名稱 TITLE 文件編號SPEC NO 版次 REV. 頁次 Page 儀器基本原理 倒立螢光顯微鏡 (IFM) PISC0020-A-001 1 Page 2 of 8 光學顯微鏡依樣品的不同可分為反射式和透射式。反射顯微鏡的物體一般是不透明的， 光從上面照在物體上，被物體反射的光進入顯微鏡。這種顯微鏡經常被用來觀察固體等，多 應用在工學、材料領域，在正立顯微鏡中，此類顯微鏡又稱作金相顯微鏡。透射顯微鏡的物 體是透明的或非常薄，光從可透過它進入顯微鏡。這種顯微鏡常被用來觀察生物組織。 顯微鏡依觀察法的不同，可分下列幾類 ： 1. 明視野觀察 (Bright Field) ：一般光學組織切片及產品表面放大觀察 2. 暗視野觀察 (Dark Field) ：小動物如螺旋桿菌及纖毛鞭毛結構等觀察，反光性強、對 比低之產品表面、刮痕缺陷觀察 3. 位相差觀察 (Phase Contrast) ：一般培養活體細胞觀察 4. 微分干涉觀察 (Differential Interference contrast) ：活體卵細胞及線蟲等觀察，LCD 導 電粒子、晶柱、 RGB或多層電路 IC及晶元、玻璃刮痕缺陷觀察 5. 螢光觀察 (Fluorescence) ：一般螢光染色標記或活體螢光如GFP 等觀察 6. 偏光觀察 (Polarized Light) ：礦物及結晶結構等觀察 每種顯微鏡一般又各有透射型和反射型二種。 在這些顯微鏡中，特別是明視野顯微鏡是構成 所有顯微鏡中組成最基本的基礎。