精选6.FCM 定量细胞参量和荧光探针修改.pptVIP

石蜡包埋组织的单细胞制备方法的建立，使流式细胞术在医学研究中得到更广泛的应用，但仍存在一些问题有待进一步解决，主要存在问题如下： ⑴样品中的碎片较多，所测得的DNA组方图质量不及新鲜组织好，组方图的峰位较宽CV值偏大。 ⑵异倍体率减少，由于组方图细胞峰CV值较大，一些近于二倍体的DNA异倍体峰被掩盖。 ⑶S期细胞百分比不如新鲜组织的S期计算精确，S期细胞的计算偏高，这仍然与CV值较大有关 ⑷DNA二倍体标准不稳定，Schutter等发现用新鲜正常组织的二倍体细胞或者用其他生物细胞 DNA含量(例如，鸡红细胞，鳟鱼血细胞等)作为石蜡包埋组织细胞DNA含量的标准不适用，石蜡包埋组织比新鲜组织细胞DNA荧光强度低，且样品间的荧光强度不稳定，解决DNA二倍体标准不稳定的办法，可将正常组织与肿瘤组织作为一个内标的二倍体标准参照，可减少DNA倍体分析的误差，对存档中的石蜡包埋组织材料，可以采用正常组织石蜡包埋标本，作为一个外参的二倍体标准，但要求采用的外参二倍体样品和肿瘤样品中加入内标准样品(例如鸡血细胞等)。 四、脱落细胞样品的采集 脱落细胞样品的采集要保证足够的细胞数，在临床实际工作中，可以收集到大量自然脱落的细胞标本，这些细胞标本经简单处理后，即可得到较好的单分散细胞，例如胸腹水，内镜刷检细胞，膀胱冲洗液等，这些材料得到的流式检测结果，要小心谨慎的分析解释，结果的