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第二章 中药化学成分的一般研究方法 中药化学成分类型 生物合成途径 乙酸-丙二酸途径 (acetate-malonate pathway，AA-MA途径) (五)复合途径 提取分离方法 溶剂提取法 CO2超临界流体提取法 水蒸气蒸馏 分离精制方法 萃取法 逆流分溶法（CCD） 液滴逆流色谱（DCCC） 沉淀法 结晶法 色谱分离法 中药有效成分化学结构的研究方法 旋光光谱(ORD) 圆二色光谱(CD) 提取液 过滤 滤液 浓缩 降温 结晶 母液 结晶析出条件： 　　　　1）有效成分浓度高 　　　　2）选择合适的溶剂 　　　　3）温度不同引起溶解度的改变 　　　　4）加速结晶的措施，加晶种 吸附色谱 凝胶过滤色谱 离子交换色谱 大孔树脂色谱 分配色谱 吸附色谱 硅胶 氧化铝：极性吸附 活性炭：非极性吸附 聚酰胺：氢键吸附 (酰胺羰基与酚类、黄酮类化合物的酚羟基，或酰胺键上的游离胺基与醌类、脂肪羧酸上的羰基) 水 甲醇 丙酮 氢氧化钠水溶液 甲酰胺 二甲基甲酰胺 尿素水溶液 洗脱能力 弱 强 凝胶过滤色谱（凝胶渗透色谱、分子筛滤过、排阻色谱） 原理：分子筛作用 葡聚糖凝胶（sephadex G） 羟丙基葡聚糖凝胶(sephadex LH-20) 大孔吸附树脂 原理：吸附性和分子筛性原理相结合 吸附性：范德华引力或氢键的 分子筛：多孔性 应用：糖与苷的分离、生物碱的精制 分配色谱 原理：被分离成分在固定相和流动相之间的 分配系数不同 正相分配色谱：流动相极性 固定相极性 反相分配色谱：流动相极性固定相极性 HPLC、MPLC、LPLC 新药开发 选定研究对象 收集原料 筛选活性 有活性 动物实验 制剂工业化研究 申报临床研究 （Ⅰ期临床、 Ⅱ期临床） 申报新药证书及生产批准文号 试生产 Ⅲ期临床实验（安全性考察） 正式生产 1H-NMR：早 13C-NMR：晚 核磁共振谱（NMR） S/N S/N = 13C 1H = γ3 γ3 =(1/4)3=1/64 ?倍 检测灵敏度太低 1）13C 的自然丰度低，自然界中 13C 是 12C 的1.1%（而 1H 是98.88%） 2） 13C 磁旋比γ=6.726 1H 磁旋比γ=26.752 NMR信号强度 ?γ3 13C谱测定的灵敏度只有1H 的1/600 解决办法： 脉冲付里叶变换技术和计算机，扫描次数累积，信号不断增强 碳谱的特点及提供的信息 1、优点：?化学位移范围大，分辨率高 13C : δ 0~250 ppm 1H : δ 0~20 ppm ?谱线简单，易解析 ?直接提供C骨架信息（ δ 、J） 2、缺点：?需用样品多 ? 测定时间长 ?仪器要求高 ?吸收强度不与C数目成正比， 不代表C原子个数 杂化方式 诱导效应 共轭效应 取代基构型影响 δ 影响因素： 3、提供信息 1） 13C 信号的化学位移0~250 ppm 信号之间很少重叠，识别起来比较容易 化学位移与C原子杂化方式、与周围化学环境有关，可判断C原子类型 δsp 3 δsp δsp 2 20~100 ppm 70~130 ppm 100~200 ppm 烷烃 炔烃 烯烃 2) 13C的信号裂分 ? 13C与1H均为磁性核，自旋偶合互相干扰，使对方信号裂分 ? H谱中13C核干扰极少，乎略不及，只有1H-